一、Inhibitory effect of tea polyphenals on transforming growth factor-β1 expression in rat with cyclosporine A-induced chronic nephrotoxicity（论文文献综述）
David Dolivo,Pamela Weathers,Tanja Dominko[1]（2021）在《Artemisinin and artemisinin derivatives as anti-fibrotic therapeutics》文中提出Fibrosis is a pathological reparative process that can occur in most organs and is responsible for nearly half of deaths in the developed world.Despite considerable research,few therapies have proven effective and been approved clinically for treatment of fibrosis.Artemisinin compounds are best known as antimalarial therapeutics,but they also demonstrate antiparasitic,antibacterial,anticancer,and antifibrotic effects.Here we summarize literature describing anti-fibrotic effects of artemisinin compounds in in vivo and in vitro models of tissue fibrosis,and we describe the likely mechanisms by which artemisinin compounds appear to inhibit cellular and tissue processes that lead to fibrosis.To consider alternative routes of administration of artemisinin for treatment of internal organ fibrosis,we also discuss the potential for more direct oral delivery of Artemisia plant material to enhance bioavailability and efficacy of artemisinin compared to administration of purified artemisinin drugs at comparable doses.It is our hope that greater understanding of the broad anti-fibrotic effects of artemisinin drugs will enable and promote their use as therapeutics for treatment of fibrotic diseases.
沈微[2]（2020）在《甜菊苷对小鼠肾纤维化的抑制作用及其机制研究》文中研究表明目的:研究甜菊苷对小鼠肾纤维化的抑制作用及其可能的机制。方法:体内实验选用雄性KM小鼠,随机分为假手术组、单侧输尿管结扎（UUO）模型组、甜菊苷50和100 mg/kg组以及阳性药螺内酯20 mg/kg组。给药组小鼠术后每天给予灌服相应的药物,假手术组和UUO模型组小鼠灌服等体积双蒸水。给药14天后,取空腹血和肾脏,测定各项生化指标,包括血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、肾组织中羟脯氨酸（Hyp）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）;采用HE和VG染色观察肾组织结构的变化;用Western blot方法测定肾组织中的α-SMA、collagen Ⅰ和collagen Ⅲ蛋白表达,以观察甜菊苷抗肾纤维化的疗效。同时测定肾组织中的PPARγ、NF-κB p65、TGF-β1、STAT3、p-STAT3、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4 和 Smad7 蛋白表达,以探讨甜菊苷抗肾纤维化的潜在机制。在体外,采用了 LPS诱导大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E间质转化模型和TGF-β1刺激大鼠肾成纤维细胞NRK-49F增殖分化模型。在LPS诱导NRK-52E细胞间质转化模型中,通过Western blot方法测定E-cadherin、Vimentin、α-SMA、PPARγ、NF-κB p65、STAT3、p-STAT3、TGF-β1、Smad2/3 和 p-Smad2/3 蛋白表达。为证实甜菊苷对PPARy的激活作用,应用PPARγ抑制剂GW9662预处理NRK-52E细胞2 h,观察甜菊苷抑制LPS诱导NRK-52E细胞间质转化的作用是否受到影响。在TGF-β1刺激NRK-49F细胞模型中,通过Western blot方法测定甜菊苷对α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、STAT3、p-STAT3、Smad2/3 和 p-Smad2/3 蛋白表达的影响。结果:在动物实验中,给予甜菊苷50和100 mg/kg治疗的小鼠,BUN和肾组织中Hyp含量降低,肾组织中GSH-Px水平升高,肾小管萎缩和肾间质纤维化的程度减轻,胶原面积比率降低,尤以100 mg/kg组的作用更为明显（P<0.01）。Western blot结果显示,甜菊苷可降低肾组织中α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、NF-κB p65、TGF-β1、STAT3、p-STAT3、Smad2/3 和 p-Smad2/3 的蛋白表达（P<0.05 或P<0.01）,增加PPARγ和Smad7的蛋白表达（P<0.05或P<0.01）。体外细胞实验结果显示,甜菊苷可显着上调NRK-52E细胞内E-cadherin和PPARy蛋白表达,下调 Vimentin、α-SMA、NF-κB p65、p-STAT3、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达（P<0.05或P<0.01）。而经PPARy抑制剂GW9662预处理后,甜菊苷增加E-cadherin,降低 Vimentin、α-SMA、NF-κB p65、p-STAT3、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3表达的作用被减弱或取消（P<0.05或P<0.01）。在TGF-β1刺激的NRK-49F 细胞中,甜菊苷可以显着降低 α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、p-STAT3、Smad2/3 和 p-Smad2/3 蛋白的表达（P<0.05 或P<0.01）。结论:甜菊苷具有抑制小鼠肾纤维化的作用,其机制可能是通过激活PPARγ和抗氧化作用,随后抑制NF-κB介导的STAT3活化和TGF-β1表达,从而使Smad信号通路受抑而产生的。甜菊苷能够直接抑制STAT3和Smad2/3的磷酸化,这可能也是它的作用机制之一。
MICHAEL ADU-FRIMPONG[3]（2019）在《三酰基甘油结合石榴酸和枯茗醛制备的纳米制剂用于提高生物利用度和增强抗肝毒活性》文中进行了进一步梳理肝脏疾病是对人类健康造成威胁和死亡的重要疾病之一。目前,从天然产物中获得的保肝药物仍是治疗这类疾病的有效手段。肝脏疾病主要是由有毒化学物质、过量饮酒、感染和自身免疫性疾病引起的。这些肝毒性物质大多通过诱导脂质过氧化和过度氧化应激来破坏肝细胞。因此,具有抗氧化和抗炎活性的化合物是预P防和治疗药物性肝损伤（DILI）的有效药物。然而,目前已有的抗肝毒性药物疗效低、不良反应严重、使用成本高,难以满足患者的治疗需求。因此,我们迫切需要研究其它保肝药物,以改善这种供不应求的状况,挽救更多的生命。从天然产物中分离出的保肝化合物由于水溶性差、酶P降解等原因,导致口服生物利用度低、治疗效果受差。因此,开发一种增加难溶性药物溶解度和生物利用度的纳米制剂,是解决问题行之有效的方法之一。在此,本研究所用的模型化合物,即大分子三酰甘油结合的辛酸（TPA）和小分子异丙醛（CuA）,分别从具有显着药理活性的石榴油和异丙苯油中获得,如抗癌、抗炎和抗糖尿病。然而,体内对TPA和CuA的吸收不足,以及由于快速代谢、化学不稳定性和高亲脂性导致的口服生物利用度低,对其广泛的临床应用产生了不利影响。因此,开发新型药物输送系统以增强这些油的生物活性可能是朝着正确的方向迈出的一步。因此,本研究开发了TPA和CuA纳米制剂,以提高生物利用度和增强抗肝毒性活性。本论文共分四章,共分三个方面,具体如下:主要内容如下:第一章 天然保肝化合物及其递药系统本章对天然保肝化合物即三酰甘油-石榴酸（TPA）和枯茗醛酸（CuA）及其适宜的释药系统进行了综合叙述,并重点阐释了TPA和CuA的抗氧化和抗炎活性治疗药物性肝损伤（DILI）的潜能,综述了TPA和CuA的研究现状,包括其来源、提取工艺、药物动力学、保肝效果以及面临的问题和展望。此外,本章还对提高TPA和CuA生物利用度的药物传递系统进行了探讨,为本文的研究工作奠定坚实基础。第二章 三酰基甘油-石榴酸脂质纳米制剂的制备、优化和表征本章分别采用响应面设计（BBD）、星点设计（CCD）和反应曲面法（RSM）优化载TPA的囊泡（TPA-NS）和纳米脂质体（TPA-NL）的制备工艺。通过RSM-BBD和二次模型对TPA-NS的进行了优化,得到最佳质量比为span 80（70 mg）、胆固醇（19.99 mg）相TPA（6.48 mg）。同样,将观察到的数据拟合到二次多项式万桂后,利用RSM-CCD对TPA-NL进行优化,得最佳工艺为磷脂:胆固醇（W/W）为6:1,以TPA质量（7mg）为最优独立指标。通过优化工艺制备的TPA-NS制剂呈离散球形,平均粒径较大（491.90±46.30 nm）,多分散性指数合理（PDI,0.324±0.05）,zeta电位为-38.58±0.21 mV,包封率提高（EE,87.48±4.79%）。最佳工艺制备的TPA-NL为球形,均匀分布,平均粒径较小（123.54±1.92nm）,PDI较窄（0.21±0.046）,zeta电位为-39.09±0.66mV,包封率较高（85.77±1.05%）。两种制剂的红外光谱表征表明,TPA成功包埋在囊泡和纳米脂质体小泡中。此外,TPA-NS和TPA-NL在1个月的贮藏期内相对稳定,且与游离TPA相比,TPA-NS和TPA-NL体外溶出显着。此外,TPA-NS在溶解介质中遵循威布尔函数,并结合反常扩散和菲克扩散释放机制。本章结果初步表明,传统的囊泡脂质体可以包载大分子TPA,提高体外释放。第三章 枯茗醛脂质纳米载体的配方优化、表征及体外评价本章研究了CuA自乳化纳米乳（CuA-SEN）和基于Cremophor-EL的CuA胶束（C-CuA-M）两种新型CuA制剂的制备、优化、表征和体外释放研究。通过BBD法成功优化并制得CuA-SEN和K-CuA-M纳米载体。所得的CuA-SEN体系均一、平均液滴尺寸=48.83±1.06 nm、PDI=-0.232±0.140、zeta电位=-29.92±1.66 mV、包封率EE=-91.51±0.44%;采用二次模型计算载药量（DL）为=9.77±0.75%。而且,CuA-SEN相对稳定,通过Fickian扩散机制显着增加CuA的体外药物释放（IVDR）。同时,C-CuA-M的最佳工艺为CuA（0.41 g）,Cremophor-EL（0.60 g）和水（5.0 mL）,所得胶束尺寸大小=55.14±3.79 nm,PDI=0.366±0.015,zeta电位=-15.17±2.19 mV。此外,C-CuA-M具有合适的包封率（88.45±1.42%）和载药量（8.43±0.86%）。与CuA-SEN相比,C-CuA-M体外释放率略低,且相对稳定。总之,CuA-SEN和C-CuA-M这两种制剂都具有良好的理化特性和稳定性,体外释药性能也得到了改善。第四章三酰基甘油结合的石榴酸-枯茗醛纳米制剂提高生物利用度及抗肝毒素药效本章考察了所带制备的TPA和CuA纳米制剂,即TPA-NS、TPA-NL、CuA-SEN和C-CuA-M的口服生物利用度,有效提高口服生物利用度。选择理化特性和口服生物利用度较好的制剂,对CCI4诱导小鼠肝损伤进行抗肝毒性活性评价。相对而言,TPA-NL（164.14%）较游离TPA和TPA-NS（124.22%）具有更好的口服生物利用度。更重要的是,体内研究表明:TPA-NL（2mg/kg体重）能够通过抑制炎症、减少氧化应激和恢复肝功能等机制,增强对CCI4诱导的肝损伤的肝脏保护作用。综上所述,TPA脂质纳米制剂显着提高了TPA的抗肝毒性作用。同样,CuA-SEN与游离CuA和C-CuA-M相比,血药浓度显着增加,相对口服生物利用度提高（171.45%）。体内实验结果表明:CuA-SEN（200 mg/kg体重）能够显着提高血清谷胱甘肽、SOD、CAT和TNF-α+ il-6（血清和肝组织）,同时降低AST,ALT和MDA的水平。因此,通过SEN提高CuA的生物利用度是提高该药物抗氧化、抗炎和抗肝毒性的有效手段。综上所述,通过适当脂质纳米制剂,可以提高大分子TPA和小分子CuA的生物利用度,增强其抗肝毒性活性,在保肝护肝以及肝脏疾病治疗方面具有广阔前景。
王春晓[4]（2019）在《黄芩苷对类风湿关节炎模型小鼠的治疗作用和机制》文中认为虽然对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）病因学的探索、发病机制的研究、诊断和治疗的临床实践已经经历了漫长的过程,但无论在病因学和发病机制方面,还是在诊断和治疗方面,目前仍存有众多的疑问,而且RA不仅会严重影响患者的生活质量,甚至会缩短患者的预期寿命。RA的发病率为0.5%-1%,女性多见。该病引起关节软骨及骨进展性破坏,致残致畸率高,同时伴有心肺血管代谢及心理异常等合并症。初发患者以对称性的外周关节受累为主要表现,随着疾病的进展出现关节功能的障碍,失去劳动能力。疾病后期因慢性炎症引起心肺血管及代谢性并发症导致死亡。在发病因素方面,RA的遗传结构已经通过传统的和全基因组的方法得到了较多的认识。100多个位点与该病的风险和进展有关,其中大部分涉及基因调节和免疫效应的产物。吸烟、肺部感染、维生素D（vitamine D,VitD）缺乏、肥胖以及胃肠道菌群失调等因素改变了自体的免疫耐受。在异常免疫反应的作用下,产生自身抗体,这是人们所认识到的RA发病的重要原因。RA没有治愈的方法。一直以来是全球风湿病专家面临的一个难题。用于RA的一线药物有非甾体抗炎药和糖皮质激素,它们仅仅缓解关节的肿胀及疼痛,对疾病的进展没有作用。用于RA的二线药物为控制病情慢作用抗RA药,但是这些药物普遍存在起效慢,副作用大的缺点,并且患者用药后个体差异很大。虽然靶向作用于TNF-α和IL-6的生物制剂,疗效显着,但是仍有30%-40%的患者治疗反应不佳,而且有生物制剂固有的副作用,因此,对有些RA患者的应用会受到一定的限制。黄芩是我国的传统中药,在古代就被视为黄金药材应用于多种疾病的治疗。近几年对黄芩苷（baicalin,Ba）药理作用机制的研究发现,其能够通过抑制氧化应激及IL-1β诱导的炎症因子生成减轻骨关节炎大鼠的关节损伤。黄芩苷通过抑制IL-17缓解了佐剂诱导的小鼠关节炎的炎症反应。当前缺乏关于黄芩苷对RA作用及其机制的深入探讨,作为一种潜在的治疗RA的药物,我们做了进一步的研究。本次研究中,我们应用胶原抗体和脂多糖诱导构建小鼠关节炎模型,研究黄芩苷对细胞因子（TNF-α,IL-1β,IL-6）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric synthase,iNOS）、环氧化酶（cyclooxygenase,COX）-2、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）2/9、滑液内单核细胞凋亡以及软骨降解的作用程度。进一步探讨了其对Janus激酶1/信号传导与转录因子3（Janus tyrosine kinase 1/signal transducers and activators 3,JAK1/STAT3）及丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs）信号通路的影响。以确认黄芩苷对RA的治疗作用程度及其相关机制。RA模型小鼠建立:连续10天向腹膜腔注射胶原Ⅱ单克隆抗体混合物（5mg/kg）,并在第1天和第4天向腹膜腔注射胶原Ⅱ单克隆抗体混合物的同时,每只小鼠腹腔注射100μg脂多糖,建立RA模型。实验设计和分组（每组10只）:（1）Ctrl组:正常小鼠腹膜腔注射0.9%NaCl（30mg/kg）,持续5天;（2）RA+NaCl组:从模型建立后的第1天开始,每天向腹膜腔注射0.9%NaCl（30mg/kg）,共5天;（3）RA+Ba组:从模型建立后的第1天开始,每天向腹膜腔注射Ba（30mg/kg）,共5天。治疗5天后,分别取小鼠眶后静脉的血液样本。麻醉状态下,取小鼠关节滑膜、滑液及软骨组织。观察的指标如下:1.观察各组小鼠的一般情况,并使用电子压力感测器分别测量小鼠建模前,建模后以及治疗5天后的压力疼痛阈值。2.在小鼠建模10天及治疗的5天期间,应用宏观评分系统对各组小鼠关节炎症进行评估。3.用ELISA分析不同实验条件下,小鼠外周血TNF-α、IL-1β和IL-6的水平。4.Western Blot检测小鼠滑膜及滑液中 iNOS、COX-2、MMP-2、MMP-9、JAK1/STAT3、、pJAK1/pSTAT3、、p38、、JNK、、ERK1/2及 pp38、、pJNK、、pERK1/2的表达。5.免疫荧光法检测单核细胞的细胞核形态改变,流式细胞术分析其凋亡状态。6.免疫组织化学技术检测小鼠关节软骨的降解程度。本课题的研究结果如下:1.小鼠的一般情况:Ctrl组小鼠精神好,反应灵敏,爪子无红肿,皮温正常,活动正常。进食及饮水均正常。RA+Ba组小鼠活动相对较少,爪子肿胀,皮温不高,精神可,反应稍差,进食及饮水基本正常。RA+NaCl组小鼠活动明显减少,爪子肿胀明显,皮温高,精神差,易烦躁,反应差,进食及饮水减少。2.疼痛阈值测定:经Ba治疗5天,RA+Ba组与生RA+NaCl组相比,痛觉阈值有显着升高的趋势,具有显着性差异（P<0.05）;但与Ctrl组相比,痛觉阈值仍处在较低的水平,具有显着性差异（P<0.01）。这表明虽然Ba具有一定的缓解疼痛的作用,并不能使小鼠的痛觉行为恢复到正常水平。3.关节炎评分:在10天的建模过程中,模型组小鼠的关节炎评分逐渐升高,第8天的评分明显升高,疾病开始发作,第10天关节炎评分达到高峰。治疗第4天及第5天RA+Ba组小鼠关节炎评分与RA+NaCl组相比,显着降低,具有显着性差异（P<0.05）。4.经Ba治疗后5天后,RA+Ba组与RA+NaCl组相比,TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平显着下调,差异有统计学意义（P<0.05）;但与Ctrl组相比,TNF-α、IL-1β和IL-6仍然维持在较高的水平,具有显着性差异（P<0.01）。5.经Ba治疗5天后,RA+Ba组与RA+NaCl组相比,iNOS和COX-2的表达水平显着下调,差异有统计学意义（P<0.05）;但与Ctrl组相比,iNOS和COX-2仍然维持在较高的水平,差异有统计学意义（P<0.01）;RA+Ba组与RA+NaCl组相比,MMP-2和MMP-9的表达水平显着下调,具有显着性差异（P<0.05）。6.单核细胞形态及凋亡分析:核凝聚是细胞凋亡的前兆。经Ba治疗5天后,RA+Ba组小鼠滑膜单核细胞的细胞核表现出更多的凝聚性,经流式细胞术分析,RA+Ba组的凋亡率显着增加。7.经Ba治疗5天后,RA+Ba组小鼠组织内虽然可见局部的炎症细胞浸润,蛋白多糖消耗及软骨侵蚀,但较RA+NaCl组的破坏性较小。8.经Ba治疗5天后,RA+Ba组与RA+NaCl组相比,pJAK1和pSTAT3的表达水平显着下调,差异有统计学意义（P<0.05）;但与Ctrl组相比,仍然维持在较高的水平,具有显着性差异（P<0.01）;RA+Ba组与RA+NaCl组相比,pp38的表达水平无显着性变化,与Ctrl组相比,pp38的表达上调,具有显着性差异（P<0.01）;RA+Ba组RA+NaCl组相比,pJNK的表达水平无显着性变化,与Ctrl组相比,pJNK的表达上调,具有显着性差异（P<0.01）;RA+Ba组与RA+NaCl组相比,pERK1/2的表达水平无显着性变化,与Ctrl组相比,pERK1/2的表达水平显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。本课题的研究结果表明:1.应用Ⅱ型胶原单克隆抗体混合物及脂多糖腹腔注射可以成功构建小鼠RA的动物模型,用于实验的研究。2.黄芩苷可有效降低RA模型小鼠外周血TNF-α、IL-1β和IL-6的水平,具有缓解RA疾病状态的效应。3.黄芩苷能够抑制RA小鼠滑膜及滑液中iNOS和COX-2表达,并促进单核细胞的凋亡。4.黄芩苷能够降低RA小鼠滑膜及滑液中MMP-2和MMP-9蛋白表达,减轻软骨的降解。5.黄芩苷可抑制RA小鼠滑膜及滑液中pJAK1/pSTAT3信号通路的激活,但对pMAPKs（pERK1/2,pJNK和pp38）信号通路无显着影响作用。
李翔[5]（2017）在《槲皮素通过Nrf2通路对创伤性脑损伤后线粒体损伤的保护作用研究》文中进行了进一步梳理研究背景随着经济、社会的发展,创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）成为生活中致死率和致残率较高的疾病之一[1,2]。其对患者的身心健康造成了一定程度的不利影响,也给社会带来了严重负担。TBI后脑组织代谢加速而此时受伤脑组织中的线粒体的形态、功能发生改变致其无法进行正常的能量代谢从而使细胞的正常生理功能发生故障,最终导致后期更为严重的继发性损伤[3]。而在此过程中,大量线粒体形态和结构遭到破坏,导致线粒体无法正常供应能量,引起神经元细胞的死亡。所以,增强线粒体自身的生物合成以改善线粒体的能量代谢,可大大减少细胞的损伤,起到保护神经元的作用。第一部分槲皮素可在TBi后激活Nrf2通路并保护线粒体损伤目的探讨槲皮素通过Nrf2途径对TBI后线粒体损伤的保护作用。方法选取雄性成年ICR小鼠,采用自由落体模型,分为四组:假手术组（sham组）、外伤组（TBI组）、外伤+溶剂组（TBI+vehicle组）、外伤+槲皮素组（TBI+quercetin组）。在伤后24h取伤灶周围大脑皮层组织,使用Western blot检测细胞核及胞浆的中Nrf2蛋白的表达情况;检测线粒体及胞浆中Bax及CytC的浓度。使用免疫组化检测Nrf2蛋白由胞浆向胞核转移情况;用酶标仪检测线粒体SOD及MDA浓度。结果与假手术组相比,外伤组和溶剂组Nrf2表达增强且向核内转移明显增多。线粒体Cyt C及SOD含量减少,而Bax与MDA含量增多。槲皮素干预后不但促进了 Nrf2的入核和表达,而且使创伤性脑损伤后线粒体的氧化应激相关蛋白表达减少。。结论槲皮素可进一步激活TBI后Nrf2信号通路,减轻TBI后线粒体的破坏。第二部分Nrf2通路在槲皮素减轻TBI后线粒体破坏中的作用目的应用Nrf2基因敲除小鼠来验证Nrf2通路在TBI后槲皮素对线粒体保护过程中的作用。方法选取野生型[Nrf（+/+）]小鼠与Nrf2基因敲除型[Nrf（-/-）]小鼠,采用相同的自由落体颅脑损伤模型。并在伤后30min给予腹腔注射槲皮素。在伤后24h取伤灶周围大脑皮层组织使用Western blot检测线粒体及胞浆中Bax及Cyt C的浓度。用酶标仪检测线粒体SOD及MDA浓度。结果与野生型小鼠相比,Nrf2基因敲除小鼠TBI后线粒体保护作用明显减弱。结论Nrf2通路在槲皮素在TBI后线粒体保护中起重要作用。
史强[6]（2012）在《吡非尼酮对心脏成纤维细胞功能的影响及作用机制研究》文中认为心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts, CFs）是心肌中数量最多的一类细胞,约占心脏细胞总数的60%-70%。CFs遍布于心肌组织之中,包绕着心肌细胞并与心肌细胞外基质（extracellular matrix, ECM）相连接。CFs的生物学功能极为广泛,能够调控细胞外基质（extracellular matrix, ECM）代谢、合成分泌多种细胞因子、介导心肌机械／电信号传导,并参与血管新生调控等过程,在心脏正常生理机能的维持及心室重构过程中发挥着重要作用。心室重构是多种心脏疾病的共同结局,其过程常伴有心肌纤维化（myocardial fibrosis, MF）的发生。CFs在MF中扮演着重要角色。病理因素刺激下,CFs会发生表型转化,活化为心脏肌成纤维细胞（cadiac myofibroblasts, CMFs）。CMFs具有更强的增殖能力、更易于发生迁移、合成ECM及对ECM代谢具有重要调节作用的基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs）增加而参与心室重构过程。另外,CMFs还分泌大量的生长因子和细胞因子,通过自分泌和旁分泌效应,作用于心肌组织中的各种靶细胞,从而进一步推动心室重构的发展。尽管在最初,CFs生物学性状和功能的诸多改变有益于受损心肌组织的修复和心功能的维持,其长期效应则导致心肌僵硬度的不断增高,心脏功能障碍的发生,并最终导致心力衰竭（heart failure, HF）。因此,以CFs为靶标的抗MF、心功能保护药物的开发已成为目前心血管疾病治疗领域极具潜力的方向。吡非尼酮（Pirfenidone）为新型小分子抗纤维化药物。在不同种属动物上,采用多种不同建模方法所致MF模型中的研究结果表明,吡非尼酮能够显着减轻MF的程度、改善心功能、逆转心室重构进程。CFs在MF过程中居于核心地位,在心室重构中发挥着关键作用。尽管已有为数较多的体内实验证据表明吡非尼酮具有抗MF作用,并且CFs可能是其作用的主要靶细胞,但吡非尼酮是否能够直接影响CFs的生物学功能,以及其作用的具体机制为何,目前尚无研究报道。因此,本研究的主要目的为探讨吡非尼酮对体外分离培养的CFs的生物学功能,主要是在心室重构过程中具有重要意义的一些功能,包括增殖、表型转化、胶原收缩、细胞因子分泌等的影响,以及其可能的作用机制,为将来吡非尼酮应用于临床抗MF治疗提供实验依据。本研究的主要结果如下：（1）吡非尼酮能够显着抑制体外培养的CFs的增殖,降低Ki67阳性细胞比率,且其效果并非由细胞毒性所致。吡非尼酮能够显着抑制CFs向CMFs的表型转化过程,降低α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,另外,毗非尼酮处理后CFs的胶原收缩能力、细胞迁移能力均显着减弱。以上结果表明,吡非尼酮能够直接影响CFs的生物学功能,从而发挥其抗MF,逆转心室重构的作用。（2）吡非尼酮降低了MMP-9的合成和分泌,相反地,升高了TIMP-1的合成和分泌,即吡非尼酮降低了CFs中MMP-9/TIMP-1的比率。MMP-9/TIMP-1比率在心室重构过程中上调,对于ECM代谢及CFs迁移等具有重要调节作用,逆转MMP-9/TIMP-1比率可能是吡非尼酮抗MF的重要分子机制之一。（3）吡非尼酮降低了CFs中TGF-p1的合成和分泌,相反地,升高了IL-10的合成和分泌。TGF-β1在MF中具有关键作用,被认为是最重要的促纤维化细胞因子,IL-10则具有抗炎症、抗纤维化作用,因而吡非尼酮对CFs合成分泌TGF-β1、IL-10的调控作用可能是其抗MF机制的另一个重要方面。以上结果表明,吡非尼酮对CFs的功能具有直接影响,在细胞水平上,吡非尼酮能够抑制CFs的增殖、胶原收缩及迁移能力；在分子水平上,吡非尼酮能够降低α-SMA的表达,下调MMP-9/TIMP-1比率,抑制促纤维化细胞因子TGF-β1的表达并促进抗炎症、抗纤维化因子IL-10的表达。近年来,随着基因组学及蛋白质组学的发展,心室重构及心肌纤维化（myocardial fibrosis, MF）相关基因的筛选鉴定工作取得了很大突破。有研究报道,在多种心脏病、MF模型心肌组织中转化生长因子β诱导基因22（TGF-p stimulated clone-22, TSC-22）表达上调,并推测其可能参与了MF过程的调控。与这些报道相一致,前期工作中我们也发现了TSC-22在有明显MF表现的心力衰竭（heart failure, HF）病人心肌组织中表达上调,但TSC-22在心肌损伤后的表达变化规律,以及其在MF的关键细胞——CFs中的表达调控因素及发挥的生物学功能尚不清楚。因此,本研究旨在探讨TSC-22蛋白水平的表达在心肌梗死（myocardial infarction, MI）后到HF发生过程中的动态变化规律、诱导其在CFs中表达的因素和机制,以及其在CFs中发挥的生物学功能,为心室重构及MF治疗提供新靶标。动物实验结果表明：大鼠MI后TSC-22蛋白在心肌组织中的表达呈动态变化,其表达在MI后1天、7天时上调,而在4周时下降。体外实验结果表明,TGF-β1通过TGF-β1I型受体,诱导TSC-22在CFs中的表达,且促使其亚细胞定位发生变化,主要在细胞核中表达；另外,接触抑制情况下,TSC-22在CFs中的表达也显着升高。另外,在CFs中转染TSC-22特异小干扰RNA（small interfering RN A, siRNA）敲低TSC-22表达后,TGF-β1诱导下CFs中α-平滑肌肌动蛋白（a-smooth muscle actin, a-SMA）的表达显着下降,这一结果提示TSC-22介导了TGF-β1诱导下的CFs向心脏肌成纤维细胞（cadiac myofibroblasts, CMFs）表型转化的过程,在其中为正性调节因子。以上结果表明,TSC-22蛋白在MI后呈动态变化规律,在急性MI期表达上调,而当发生HF时下降。在MI后不同时相中TSC-22表达水平的不同,提示其可能在不同的病理阶段中发挥着不同的生物学作用。TGF-β1及接触抑制能够诱导TSC-22在CFs中表达上调,可能是MI及其他心肌损伤或心肌病中TSC-22表达升高的重要诱导因素。细胞功能学实验结果表明,TSC-22介导了TGF-β1诱导下的CFs-CMFs表型转化过程。因此,TSC-22有望成为一个新的分子靶标,将来在临床中应用于MF的干预治疗。
王香婷[7]（2011）在《柴苓汤对环孢素A肾病大鼠a-SMA表达的影响》文中提出CsA肾病是以肾间质纤维化为特征的病理改变,表现为炎症细胞浸润,细胞外基质积聚,小管萎缩和管周毛细血管缺失,其发病机制与血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、氧化损伤、醛固酮活化等有关,其中细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）过度沉积是肾小管间质纤维化的重要特征。大量的实验证实在ECM的沉积中,转化生长因子-β1（Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1）起着重要的作用,证实其介导了肾小球的硬化和肾间质纤维化。在纤维化的进展过程中,有证据显示,肾小管上皮细胞表型转化—肌成纤维细胞转分化（tubular epithelial myofibroblast transdifferentiation ,TEMT）在肾小管病变、小管间质纤维化的发生、发展中起重要作用,其标志蛋白表达为a-平滑肌肌动蛋白（a-smooth muscular actin,a-SMA）。CsA慢性肾毒性属中医学“水肿”、“腰痛”、“虚劳”、“淋证”等疾病范畴。药毒伤肾,肝郁气滞,脾肾亏虚,水湿内停是本病的主要病机特点。治疗上应利水泻毒、补益脾肾、疏肝理气。柴苓汤是小柴胡汤与五苓散的合方,两方均出自张仲景的《伤寒杂病论》,由柴胡、黄芩、半夏、人参、甘草、生姜、大枣、猪苓、桂枝、白术、茯苓、泽泻组成,功能利水泻毒、疏肝健脾,与CsA肾病的发病机制和病变位置药证合拍。为研究利水泻毒、疏肝健脾方药治疗CsA肾病的作用机理、探索古方新用,我们采用CsA慢性肾毒性大鼠模型,观察利水泻毒、疏肝健脾中药柴苓汤及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对环孢素A肾病大鼠TGF-β1、a-SMA及Ⅲ型胶原（collagen typeⅢ,ColⅢ）表达的影响。研究结果如下:实验一柴苓汤对环孢素A肾病大鼠肾功能及病理形态学的影响健康雌性SD大鼠40只,随机分为对照组、模型组、缬沙坦组、柴苓汤组,每组10只。实验动物给予CsA 30mg·kg-1·d-1经口灌服,对照组给予等容量橄榄油,缬沙坦组予缬沙坦10mg·kg-1·d-1,柴苓汤组以柴苓汤3g·kg-1·d-1剂量给药,自来水溶解后经口灌胃,共28天。每周末将动物放入代谢笼中,收集24小时尿量,并测体重。所有动物于第29天断头处死,切取肾脏,常规制备血清及肾组织石蜡切片标本,行HE、Masson染色,观察肾组织病理学改变。检测血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（SCr）和尿肌酐（Ucr）的含量,计算肌酐清除率。结果显示:（1）对照组大鼠精神状况、活动、毛发、饮食、饮水、尿量等无明显改变。模型组精神萎靡、活动差、饮食、饮水量下降、毛发变黄、松乱、部分脱落。缬沙坦组一般状况好于模型组。柴苓汤组与缬沙坦组相同。各组大鼠体重在不同时间对比无明显差异（P>0.05）。应用CsA 2周后,模型组的尿量（19.650±9.569 ml）比正常对照组（15.650±2.015）略为增多,但各组间相互比较无明显差异。在应用CsA 3周后,模型组尿量（21.450±8.952）明显多于正常对照组（15.400±2.514）（P<0.05）,但缬沙坦组（17.400±5.854）及柴苓汤组（15.812±7.025）尿量并不增多,和正常对照组比较无显着差异。4周后,模型组尿量（29.150±13.695）明显高于正常对照组（15.800±2.529）及治疗组（16.700±4.939,16.734±6.198）（P<0.01）。（2）各组大鼠肾组织病理形态学改变:HE染色显示对照组肾小管上皮细胞排列整齐,无水肿;模型组肾小管上皮细胞坏死、脱落,间质大量炎性细胞浸润;缬沙坦组及柴苓汤组小管上皮细胞水肿、坏死、脱落及炎性细胞浸润均较模型组为轻。Masson染色结果显示对照组未见异常。模型组结构紊乱,小管间质胶原沉积显着增多。柴苓汤组及缬沙坦组小管间质胶原沉积较模型组明显减少。（3）各组大鼠尿素氮、血肌酐、肌酐清除率的变化:模型组大鼠尿素氮（11.395±1.824mmol/L）、血肌酐（99.067±5.426μmol/L）较对照组（6.3450±1.053,79.117±3.511）明显升高（ P < 0.01 ）,肌酐清除率（ 0.2823±0.0466ml/min ）较对照组（0.5415±0.0257）明显降低（P<0.01）。用药后,缬沙坦组及柴苓汤组尿素氮（8.615±0.878,7.160±0.679）、血肌酐（87.817±13.189,82.933±9.239）较模型组均明显降低（P<0.01）,肌酐清除率（0.3428±0.0624,0.3465±0.0383）较模型组明显升高（P<0.05）。实验二柴苓汤对环孢素A肾病大鼠a-SMA表达的影响模型复制、分组、给药方法同上,共28天。留取肾脏,采用RT-PCR、Western-Blot、免疫组化、流式细胞术检测大鼠肾脏a-SMA蛋白及mRNA的表达。结果显示:（1）采用RT-PCR测定a-SMA mRNA表达,结果显示对照组大鼠呈弱表达（ 0.9177±0.1239 ）,模型组表达明显增强（1.1950±0.0467）,与对照组相比有显着差异（P<0.01）,柴苓汤组（0.9857±0.0760）及缬沙坦组（1.0503±0.1420）较模型组表达明显降低（P<0.05）。（2）Western Blot检测肾组织a-SMA蛋白结果显示对照组大鼠肾组织a-SMA蛋白少量表达（0.2766±0.1405）,模型组表达显着增强（0.8788±0.3104）,与对照组相比差异有显着性（P<0.01）,柴苓汤组（0.5083±0.1092）及缬沙坦组（0.5467±0.0737）a-SMA的表达较模型组显着降低。（3）肾组织a-SMA免疫组化检测:光镜下对照组仅在血管平滑肌细胞强阳性表达,肾小球、肾小管及间质未见表达;模型组a-SMA表达主要在皮质区及皮髓交界的小管间质区,柴苓汤组及缬沙坦组小管间质区a-SMA表达较模型组明显减少。（4）肾组织a-SMA流式细胞术检测分析结果显示,a-SMA蛋白表达定量荧光指数（FI）模型组（0.9847±0.0065）明显高于对照组（0.8197±0.0064）（P<0.01）;柴苓汤组（0.9111±0.0068）及缬沙坦组（0.9131±0.0126）蛋白表达定量荧光指数明显低于模型组（P<0.01）。实验三柴苓汤对环孢素A肾病大鼠TGF-β1表达的影响模型复制、分组、给药方法同上,共28天。留取肾脏,采用RT-PCR、免疫组化检测大鼠肾脏TGF-β1蛋白及mRNA的表达。结果显示:（1）采用RT-PCR检测TGF-β1 mRNA表达,结果显示对照组大鼠呈弱表达（ 0.7927±0.0899 ）,模型组表达明显增强（1.1270±0.1239）,与对照组相比有显着差异（P<0.01）,柴苓汤组（0.8683±0.0938）较模型组明显降低（P<0.05）。（2）肾组织TGF-β1免疫组化表达结果显示对照组呈弱表达。模型组表达显着增强,见于肾小管、间质及肾小球处,柴苓汤组及缬沙坦组小管间质区TGF-β1表达较模型组明显减弱。实验四柴苓汤对环孢素A肾病大鼠ColⅢ表达的影响模型复制、分组、给药方法同上,共28天。留取肾脏,采用RT-PCR、Western Blot、免疫组化检测大鼠肾脏ColⅢ蛋白及mRNA的表达。结果显示:（1）采用RT-PCR检测ColⅢmRNA表达,结果显示对照组大鼠呈弱表达（0.7630±0.0557）,模型组表达明显增强（0.9180±0.0593）,与对照组相比差异有显着性（P<0.05）,柴苓汤组（0.8107±0.0761）及缬沙坦组（0.8300±0.0719）表达明显降低。（2）Western Blot检测肾组织ColⅢ蛋白结果显示对照组大鼠肾组织ColⅢ蛋白少量表达（0.2129±0.1089）,模型组表达明显增强（0.7334±0.1396）,与对照组相比差异有显着性（P<0.01）,柴苓汤组（0.3337±0.0802）及缬沙坦组（0.4343±0.1997）ColⅢ的表达较模型组显着降低（P<0.01,P<0.05）。（3）肾组织ColⅢ免疫组化表达结果显示,对照组极少量表达,呈浅黄色。模型组表达显着增加,可见棕黄色甚至呈棕褐色染色,柴苓汤组及缬沙坦组小管间质区ColⅢ表达较模型组明显减弱。结论:1柴苓汤对环孢素A肾病大鼠的肾组织结构损伤具有明显的改善作用,可减轻胶原纤维的表达及纤维化程度,降低血肌酐、尿素氮,升高肌酐清除率,改善肾功能。2柴苓汤可下调CsA所诱导的肾组织a-SMA的高表达,通过抑制肾小管上皮细胞表型转化延缓小管间质纤维化的进程。3柴苓汤可抑制CsA肾病大鼠肾组织中TGF-β1mRNA及蛋白的表达,从而减少细胞外基质沉积,延缓肾间质纤维化进程。4柴苓汤可下调CsA肾病大鼠肾组织中ColⅢmRNA及蛋白的表达,抑制胶原沉积,促进胶原降解,拮抗CsA肾病大鼠纤维化,减缓肾病进程。
王妍春[8]（2010）在《大黄有效部位及伟素对慢性环孢素肾病大鼠的防治研究》文中指出环孢霉素A （cyclosporine A, CsA）是由真菌产生的环状11肽活性物质。自1983年FDA批准用于实体器官移植后,迅速成为器官移植抗排斥和自身免疫性疾病治疗的一线药物,临床应用较多,疗效确切。但该药的副作用特别是慢性肾毒性限制了它的广泛应用。由CsA肾毒性导致的慢性肾功能进行性衰退的慢性环孢素肾病（chronic cyclosporine nephropathy, CCN）以渐进性肾功能不全、入球小动脉透明样变性、炎症细胞浸润、条索状间质纤维化和肾性免疫原性增加为主要特征性病理改变。Mihatsch等对肾移植患者的肾活检资料进行分析,证实CsA所致肾小管中毒的发生率为9%～37%,急性肾功能衰竭伴弥漫性间质纤维化的发生率为0%～19%,条索状间质纤维化以及CsA相关动脉病变的发生率分别为5%～50%和5%～30%。研究认为,CCN的病因与肾小球缺血、肾内肾素血管紧张素系统（renin-agiotensin system, RAS）激活、细胞凋亡内质网应激和自体吞噬、单核巨噬细胞（monocyte/macrophage, MC/MP）浸润及炎症、转化生长因子β1（transforming growth factor-betor 1, TGF-β1）与基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs）/金属蛋白酶抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinases, TIMPs）调节失衡、骨桥蛋白、核因子-kappa B （nuclear factor-kappa B, NF-κB）、Toll-样受体等有关。针对其发病机制,人们进行了大量的临床和实验研究,并试图应用西药、中药或采取减量甚至停用CsA的方式来防治CCN。大黄是我国传统中药之一,大黄有效部位（Rhubarb’s effective parts,Rep）为大黄醇提液过大孔吸附树脂得到的洗脱物,包含以下五种成分：大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素。文献报道其在改善脑缺血、脑代谢及抗排斥反应方面效果显着。伟素（舒洛地特,sulodexide）是经过高度纯化的生物制品,与肝素同属糖胺聚糖（glycosaminoglycans,GAGs）类药物。GAG通常指一大类分子,包括肝素、低分子肝素、硫酸类肝素、硫酸类皮肤素以及糖胺聚糖类化合物,它们具有共同的生物学活性即保护肾脏的活性。伟素由两种GAG组成,在实验模型中具有预防糖尿病肾病（dibetic nephropathy,DN）的活性,能够抑制TGF-β1过度表达以及肾小球细胞高浓度葡萄糖诱导的基质合成,修复内皮细胞机能障碍。但Rep和伟素是否可以通过改善肾脏缺血和代谢,对抗肾排斥反应及保护肾脏活性等机制影响CCN的发生和发展,目前尚未可知,亦无相关文献报道。为此,我们复制了CCN大鼠模型,观察不同剂量Rep和伟素在不同时间点对模型大鼠的干预和治疗作用,并对其可能的作用机理进行探讨。本论文分以下2部分。第1部分Rep及伟素对CCN大鼠的干预作用目的：观察Rep及伟素对CCN的预防效果。方法：1.实验分组及生化指标测定：SPF级健康雄性Wistar大鼠54只（180～200g）,给予低盐饲料,自由饮水,适应性喂养1周后,将动物随机分为9组,分别为：第一组正常对照组（VH3：橄榄油5ml·kg-1·d-1×28 d）;第二组模型组（MX3:CsA 25mg·kg-1·d-1×28 d）；第三组阳性对照组（YDY:CsA 25mg·kg-1·d-1+贝那普利5mg·kg-1·d-1×28d）；第四组Rep干预1组（DY1：Rep 50mg·kg-1·d-1×7d,后给予CsA 25mg·kg-1·d-1+Rep 50mg·kg-1·d-1×28 d,二药灌胃时间间隔2h以上）；第五组Rep干预2组（DY2:CsA 25mg·kg-1·d-1+Rep 50mg·kg-1·d-1×28d,二药灌胃时间间隔2h以上）；第六组Rep干预3组（DY3:CsA 25mg·kg-1·d-1×7d,后给予CsA 25mg·kg-1·d-1 +Rep 50mg·kg-1·d-1×21d,二药灌胃时间间隔2h以上）；第七组伟素干预1组（WY1：伟素10mg·kg-1·d-1×7d,后给予CsA 25mg·kg-1·d-1+伟素10mg·kg-1·d-1×28d）;第八组伟素干预2组（WY2:CsA 25mg·kg-1·d-1+伟素10mg·kg-1·d-1×28d）;第九组伟素干预3组（WY3:CsA 25mg·kg-1·d-1×7 d,后给予CsA 25mg·kg-1·d-1+伟素10mg·kg-1·d-1×21d）。按实验设计,CsA及Rep为灌胃给药,伟素为腹腔注射。所有大鼠均于第28天处死。实验期间在用药前和用药后的每周最后一天测量大鼠体重并调整灌胃和腹腔注射剂量。同时采集大鼠尾静脉血,测定血肌酐（serum creatinine, Scr）和血尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）。2.取肾组织行HE、PAS及Masson染色观察病理变化,分析各组小动脉透明样变性、肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis, RIF）情况并通过半定量积分评估其程度。入球小动脉透明样变性通过计数入球及球旁小动脉病变来判断。每个标本至少检查50个小动脉,进行下列评分：0=无透明样变性；1=早期透明样变性；2=明显透明样变性。RIF通过计数每个视野损伤面积的百分比来评估：0=正常肾间质,0.5=<5%,1=5%到15%,1.5=16%到25%,2=26%到35%,2.5=36%到45%,3=>45%肾间质面积损伤。3.同时取肾组织行电镜检查观察超微结构变化。4.冰上分离肾脏并采取免疫组织化学法检测肾组织CD68、Ⅲ型胶原及Ⅳ型胶原的表达,逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肾组织TGF-β1和TIMP-1 mRNA表达,ELISA法检测TGF-β1、TIMP-1和MMP-9蛋白表达。结果：1.体重、BUN、Scr:1.1体重：给予CsA后,MX3组大鼠1周后增长延缓,2周后体重下降,第2-4周与VH3相比,体重下降（P<0.05）；所有干预组及YDY组均高于MX3组（P<0.05）,其中DY3、WY3、YDY低于VH3组（P<0.05）,其它组与VH3组相近（P>0.05）。1.2 BUN:MX3组大鼠第1周血BUN水平开始上升,第2-4周,与VH3组相比,差异显着（P<0.05）; DY1、WY1、WY2组大鼠BUN水平无上升（P>0.05）,均低于MX3组（P<0.05）,与VH3组相近（P>0.05）。YDY、DY3、WY3组于1周后仍见上升,3周后逐渐下降且均高于VH3组、低于MX3组（P<0.05）,而DY2逐渐上升,于4周开始下降,均低于其他三组（P<0.05）,其它三组无差别（P>0.05）。1.3 Scr：与VH3组相比,第1～4周,MX3组大鼠Scr水平上升（P<0.05）。第2-4周所有干预组及YDY组均低于MX3组（P<0.05）；与VH3组比,DY1组较低（P<0.05）, DY2、WY1与之相近（P>0.05）,其它干预组及YDY组上升（P<0.05）。WY2组低于YDY、DY3、WY3组（P<0.05）,而DY3、WY3组于4周下降（P<0.05）均低于YDY组（P<0.05）。2.光镜结果：VH3组大鼠肾组织结构正常。MX3组大鼠于四周后肾小球毛细血管袢开放不佳,近曲小管细胞内空泡变性坏死,小管萎缩同时伴单核细胞浸润,可见灶状及条带状RIF。肾内小动脉管壁肌性增厚,入球小动脉透明样变性及损伤,偶见局灶性肾小球硬化。而干预组及YDY组大鼠的上述病变明显减轻,其小动脉透明样变性及RIF也明显减轻。2.1小动脉透明样变性评分：各干预组及YDY组评分均高于VH3组,低于MX3组（P<0.05）；干预组中DY1、DY2、DY3、WY3高于YDY组（P<0.05）,其它干预组与YDY组相近（P>0.05）。伟素与Rep比较：伟素各个时间点评分均低于Rep组（P<0.05）,而且第三个时间点高于前两个时间点（P<0.05）,前两个时间点间无差别（P>0.05）；Rep各个时间点间无差别（P>0.05）。2.2 RIF评分：各干预组及YDY组均高于VH3组,低于MX3组（P<0.05）：干预组中DY3、WY3高于YDY组（P<0.05）,其它干预组与YDY组相近（P>0.05）。伟素与Rep比较：在第1个时间点伟素低于Rep组（P<0.05）,其余2个时间点二者无差别（P>0.05）。二药均显示第三个时间点高于前两个时间点（P<0.05）,前两个时间点间无差别（P>0.05）。3.肾组织超微结构变化：VH3组肾组织超微结构正常。MX3组大鼠肾小球基底膜增厚,系膜基质增宽、增多,足细胞足突广泛融合、微绒毛稀疏；小管基底膜不规则增厚、断裂,上皮细胞大量空泡、大小不等,细胞核固缩,小管微绒毛脱落,上皮细胞内溶酶体、线粒体明显增多,间质见较多胶原纤维。DY1、DY2、WY1、WY2组大鼠上述病变明显减轻,偶见足突融合,系膜基质节段轻度增多,小管可见少量空泡,溶酶体、线粒体较少,小管基膜完整。YDY、DY3、WY3组病变较重但较MX3组轻。4.肾组织免疫组织化学：各组大鼠肾间质CD68、胶原Ⅲ、胶原Ⅳ表达变化趋势与HE染色显示的炎性细胞浸润趋势相似。给药4周后,MX3组CD68、胶原Ⅲ、胶原Ⅳ的表达高于对照组和预防组（P<0.05）。4.1 CD68表达：DY1、DY2、WY1、WY2组CD68表达水平与VH3组相近（P>0.05）, YDY、DY3、WY3组高于VH3组（P<0.05）；各干预组及YDY组均低于MX3组（P<0.05）；YDY组与DY3、WY3组相近（P>0.05）,均高于其它用药干预组（P<0.05）。伟素与Rep比较：在第3个时间点Rep低于伟素组（P<0.05）,其余2个时间点二者无差别（P>0.05）。两药均显示第三个时间点高于前两个时间点（P<0.05）,前两个时间点间无差别（P>0.05）。4.2胶原Ⅲ表达：DY2、WY2组胶原Ⅲ表达水平与VH3组相近（P>0.05）,其它干预组及YDY组高于VH3组（P<0.05）；各干预组及YDY组均低于MX3组（P<0.05）；而与YDY组相比,WY1组与之相近（P>0.05）,DY3、WY3组较之增高（P<0.05）,其它干预组均降低（P<0.05）。伟素与Rep比较：在第3个时间点伟素低于Rep组（P<0.05）,其余2个时间点二者无差别（P>0.05）。两药均显示时间点3>2>1（P<0.05）。4.3胶原Ⅳ表达：WY1与VH3组胶原Ⅳ表达相近（P>0.05）,其它干预组及YDY组高于VH3组（P<0.05）；各干预组及YDY组均低于MX3组（P<0.05）；而与YDY组比,WY1组降低（P<0.05）,DY3、WY3组升高（P<0.05）,其它干预组与之相近（P>0.05）。伟素与Rep比较：在第1、3个时间点伟素低于Rep组（P<0.05）,第2个时间点二者无差别（P>0.05）。两药均显示第3个时间点高于前2个时间点（P<0.05）,伟素第2个时间点又高于第1个时间点（P<0.05）,而Rep前两个时间点间无差别（P>0.05）。5.TGF-β1和TIMP-1mRNA表达5.1 TGF-β1mRNA表达：VH3组有少量TGF-β1mRNA表达,除WY1组外,MX3以及其它干预组表达增加（P<0.05）,干预组及YDY组的表达要低于MX3组（P<0.05）,而各干预组中的表达要低于YDY组（P<0.05）。伟素与Rep比较：伟素各个时间点均低于Rep （P<0.05）,且Rep在时间点3>2>1（P<0.05）,而伟素在时间点1、2效果相近（P>0.05）,但低于时间点3（P<0.05）。5.2 TIMP-1mRNA表达：VH3组有少量TIMP-1mRNA表达,MX3、YDY以及干预组表达增加（P<0.05）,干预组及YDY组表达均低于MX3组（P<0.05）,而各干预组的表达要低于YDY组（P<0.05）。伟素与Rep比较：伟素各个时间点均低于Rep组（P<0.05）,而二者TIMP-1mRNA表达水平均随着用药时间的延迟而逐渐增高（P<0.05）。6. TGF-β1、TIMP-1和MMP-9蛋白表达6.1 TGF-β1蛋白表达：WY1、WY2组TGF-β1蛋白表达与VH3组相近（P>0.05）, DY1、DY2、WY3组比之降低（P<0.05）, DY3、YDY组比之升高（P<0.05）；各组均高于MX3组（P<0.05）,低于YDY组（P<0.05）。伟素与Rep比较：各组之间差异均有显着性（P<0.05）,在前两个时间点用药Rep低于伟素组,而在时间点3,正好相反。Rep组在时间点3高于2、1（P<0.05）,后二时间点间无差别（P>0.05）；而伟素组在时间点1、2干预用药效果相近（P>0.05）,但高于时间点3（P<0.05）。6.2 TIMP-1蛋白表达：DY3、WY1、WY2组TIMP-1蛋白表达与VH3组相近（P>0.05）,DY1、DY2、WY3组比之降低（P<0.05）,YDY组升高（P<0.05）；各干预组均低于MX3组【除DY3（P=0.05）外P值均<0.05】,而YDY组高于MX3组（P<0.05）；各干预组均低于YDY组（P<0.05）。伟素与Rep比较：在时间点1、2Rep低于伟素组（P<0.05）,在时间点3伟素低于Rep组（P<0.05）。伟素组在时间点3低于时间点2、1（P<0.05）,Rep在时间点3高于时间点2、1（P<0.05）,而各自在时间点2与1比差异无显着性（P>0.05）。6.3 MMP-9蛋白表达：MX3、WY1组MMP-9蛋白表达水平与VH3组相近（P>0.05）,而其它干预组及YDY组均增高（P<0.05）,以YDY组为最高（P<0.05）。伟素与Rep比较：在时间点1和3伟素低于Rep组（P<0.05）,而在时间点2 Rep低于伟素组（P<0.05）；Rep组在各个时间点基本一致（P>0.05）,而伟素组各个时间点MMP-9蛋白表达水平由低到高为1<3<2（P<0.05）。结论：1.伟素和Rep单独干预用药均可减轻CsA肾毒性,甚至可消除其部分毒性,早期干预效果更好。2.采用伟素或Rep预防CsA肾毒性优于贝那普利。3.伟素在改善小动脉透明样变性方面优于Rep；改善RIF方面,提前给药时伟素优于Rep,而同时及后期给药干预时效果相当,但干预机理不同。第2部分Rep及伟素对CCN大鼠的治疗作用目的：复制CCN模型,并于2周后停用CsA,观察停用后肾毒性能否自行消除；同时观察Rep及伟素对CCN是否存在治疗作用；并评估其疗效。方法：1.实验分组：SPF级健康雄性Wistar大鼠78只（180～200 g）,给予低盐饲料,自由饮水,适应性喂养1周后,将动物随机分为9组分别为：第一组正常对照组（VH1：为对照1组,n=6,给予橄榄油5ml·kg-1·d-1×14d,第14天处死；VH2：为对照2组,给予橄榄油5ml·kg-1·d-1×14d,后改为注射用水5ml·kg-1·d-1×14d,第28天处死；VH3：为对照3组,给予橄榄油5ml·kg-1·d-1×28d,第28天处死）；第二组模型组（MX1：为模型1组,CsA 25mg·kg-1·d-1×14d,第14天处死；MX2：为模型2组,CsA 25mg·kg-1·d-1×14d,后改为注射用水5ml·kg-1·d-1×14d,第28天处死；MX3：为模型3组,给予CsA25mg·kg-1·d-1×28d,第28天处死）；第三组阳性对照组（YDZ：CsA25mg·kg-1·d-1×14d,后改为贝那普利5mg·kg-1·d-1×14d）；第四组Rep治疗1组（DZ1：CsA 25mg·kg-1·d-1×14d,后改为Rep 25mg·kg-1·d-1×14d）；第五组Rep治疗2组（DZ2：CsA 25mg·kg-1·d-1×14d,后改为Rep50mg·kg-1·d-1×14d）；第六组Rep治疗3组（DZ3：CsA 25mg·kg-1·d-1×14d,后改为Rep 100mg·kg-1·d-1×14d）；第七组伟素治疗1组（WZ1：CsA25mg·kg-1·d-1×14d,后改为伟素10mg·kg-1·d-1×14d）；第八组伟素治疗2组（WZ2：CsA 25mg·kg-1·d-1×14d,后改为伟素20mg·kg-1·d-1×14d）；第九组伟素治疗3组（WZ3：CsA 25mg·kg-1·d-1×14d,后改为伟素40mg·kg-1·d-1×14d）。按实验设计CsA及Rep为灌胃给药,伟素为腹腔注射。第三至八组均于第28天处死。第九组因有2例死亡而退出实验。2.实验观察及所有指标检测同第1部分。结果：1.体重、BUN、Scr:1.1体重：除第九组大鼠外,其余组大鼠均存活并纳入最后统计。第1天各组大鼠体重差异无显着性（P>0.05）；第14天模型组及治疗组、YDZ组大鼠体重差异无显着性（P>0.05）,而与正常对照组大鼠比体重下降（P<0.05）；第21天,MX3组大鼠体重继续下降,其它组（除VH1、MX1已处死外）大鼠体重均上升（P<0.05）,至28天各组体重均较前上升,以MX3、WZ2组与前相比差异无显着性（P>0.05）,其它组均有显着差异（P<0.05）。第28天以VH2、VH3组体重最重,所有组与MX3组（除VH1、MX1已处死）比均升高（P<0.05）,各治疗组与YDZ及MX2组比差异无显着性（P>0.05）。1.2 BUN、Scr:第1天,各组BUN、Scr比较差异无显着性（P>0.05）；第7天、14天,各组与正常对照组相比BUN、Scr均上升（P<0.05）；第28天各组（除VH1、MX1已处死外）与MX3组相比BUN、Scr下降（P<0.05）；与MX2组相比,DZ1、DZ2组BUN上升（P<0.05）,DZ1、DZ2、WZ2组Scr上升（P<0.05）,而其它治疗组及YDZ组无变化（P>0.05）；各治疗组及YDZ与正常对照组相比无差别（P>0.05）；与YDZ组相比,DZ1、DZ2组BUN上升（P<0.05）, DZ1、DZ2、WZ2 Scr上升（P<0.05）,其它治疗组无变化（P>0.05）。2.光镜结果：正常对照组大鼠肾组织结构正常。MX3组改变同第1部分。MX1组大鼠肾小球毛细血管袢开放不佳,间质见单核细胞浸润,散在条带状间质纤维化,部分入球小动脉透明样变性,但上述改变均轻于MX3组。而YDZ组及MX2组大鼠的上述病变明显减轻,治疗组趋于正常。小动脉透明样变性及RIF见下：2.1小动脉透明样变性评分：各治疗组及YDZ组与正常对照组比无改变（P>0.05）；与模型MX1、MX3组比减轻（P<0.05）；与MX2组比无差别（P>0.05）；而治疗组与YDZ组比亦无差别（P>0.05）。2.2 RIF评分：正常对照组见少量RIF；模型组均加重以MX3组最重,MX1次之,MX2最轻（P<0.05）；而YDZ与MX2组相似（P>0.05）；治疗组均轻于YDZ、MX2组（P<0.05）,重于正常对照组（包括VH1、VH2、VH3）（P<0.05）。伟素与Rep比较：各组由轻到重依次为WZ1<DZ2<DZ1、DZ3、WZ2（P<0.05）。而DZ1、DZ3、WZ2间差别无显着性（P>0.05）。3.肾组织超微结构变化：正常对照组肾组织超微结构正常。MX3组改变同第1部分。MX1组大鼠病变稍轻,足突部分融合,系膜基质轻度增多,小管可见大量空泡、上皮细胞核缘不规整、染色质增多、可见溶酶体、线粒体,小管基膜厚度不一,节段断裂,偶见间质胶原纤维。MX2组病变轻微,YDZ及治疗组基本正常。4.免疫组织化学4.1 CD68表达：CD68表达由低到高为VH1、VH2、VH3<MX1<各治疗组及YDZ组<MX2<MX3组（P<0.05）。各治疗组与YDZ组相比,DZ1降低（P<0.05）；DZ2与之相当（P>0.05）; DZ3、WZ1、WZ2均增高（P<0.05）。伟素与Rep比较：各组以DZ1表达最低,接下来依次为DZ2、WZ1、WZ2、DZ3（除WZ2与DZ3之间比较P>0.05,余P<0.05）。4.2胶原Ⅲ表达：其表达以正常对照组（VH1、VH2、VH3）、DZ1、DZ2、DZ3最低（互相比较P>0.05）；模型组均增高（P<0.05） （MX3>MX2>MX1, P<0.05）; YDZ、WZ1、WZ2与MX2相近（P>0.05）,高于MX1（P<0.05）,低于MX3（P<0.05）。伟素与Rep比较：Rep各组均低于伟素组（P<0.05）,而同种药物不同剂量间无差别（P>0.05）。4.3胶原Ⅳ表达：表达在正常对照组（VH1、VH2、VH3）、MX2、DZ2、WZ1相近（P>0.05）; MX1、MX3、YDZ、DZ1、DZ3、WZ2增高（P<0.05）,而以MX3组为最高（P<0.05）,其次为YDZ（P<0.05）,其余四组最低（P<0.05）（四组间P>0.05）。伟素与Rep比较：各组以DZ2、WZ1表达较低（二者之间差异无显着性,P>0.05）,接下来依次为DZ3、WZ2、DZ1（三者之间差异无显着性P>0.05,与前二者相比P<0.05）。5.TGF-β1和TIMP-1mRNA表达5.1 TGF-β1mRNA表达：表达以DZ2<VH1、VH2、VH3、DZ1、DZ3、WZ1（之间P>0.05）<WZ2<YDZ<MX2<MX1<MX3,差异均有显着性（P<0.05）。伟素与Rep比较：各组以DZ2、WZ1、DZ1（三者之间P>0.05）表达较低,DZ3WZ2表达（二者之间P>0.05）增高（与前三组相比P<0.05）。5.2 TIMP-1mRNA表达：表达以WZ1<WZ2<VH1、VH2、VH3、DZ1（之间P>0.05） <MX2<DZ2<YDZ<DZ3<MX1<MX3,差异均有显着性（P<0.05）。伟素与Rep比较：表达由低到高依次为WZ1、WZ2、DZ1、DZ2、DZ3 （P<0.05）,而伟素组普遍低于Rep组（P<0.05）。6. TGF-β1、TIMP-1和MMP-9蛋白表达6.1 TGF-β1蛋白表达：撤退CsA后MX2组恢复至正常水平,治疗组及YDZ组均增高（P<0.05）, WZ1、DZ2、DZ1组表达高于YDZ组（P<0.05）,而WZ2、DZ3组表达水平与YDZ组相近（P>0.05）。伟素与Rep比较：除DZ3与WZ1、WZ2组差异无显着性（P>0.05）,其余各组相互比较差异均有显着性（P<0.05）。各组以WZ2、DZ3表达最低,接下来依次为WZ1、DZ2、DZ1。6.2 TIMP-1蛋白表达：撤退CsA后MX2组恢复至正常水平,而除贝那普利外,其它药物治疗均使其表达增高（P<0.05）。伟素与Pep比较：DZ3、WZ1、WZ2（三者之间P>0.05）组最低,其次为DZ2组,DZ1组表达最高（P<0.05）。6.3 MMP-9蛋白表达：表达以WZ2最高；MX1、DZ1、DZ2、WZ1（这几组间差异无显着性P>0.05）次之；VH3、MX2、MX3、DZ3、VH1、VH2、YDZ（这几组间差异无显着性P>0.05）最低（P<0.05）。伟素与Rep比较：表达以WZ2组最高,DZ1、DZ2、WZ1较高,DZ3最低。DZ3分别与DZ1、DZ2、WZ2组比差异有显着性（P<0.05）,其它组间相比P>0.05。结论：撤退CsA后,大鼠一般生化指标及肾组织小动脉透明样变性可自行恢复正常；RIF较前有所改善,但应用伟素或Rep后改善更明显,分别在应用10mg·kg-1·d-1, 50mg·kg-1·d-1时效果最好,二者作用相当。
南丽红[9]（2010）在《筋骨草总黄酮治疗系膜增生性肾小球肾炎的实验研究及其机制探讨》文中研究说明第一章理论研究系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）是肾小球疾病中最为常见的病理类型,弥漫性肾小球系膜细胞（GMC）增生和/或不同程度细胞外基质（ECM）增多是其主要的病理学特征。其发病机理至今尚未完全阐明,目前认为免疫学机制是该病的始发因素,但其本身对肾脏的直接损伤是有限的,而在此基础上激活的一系列炎症介导系统是造成肾小球损伤和产生临床表现的直接原因。鉴于此原因,MsPGN出现大量蛋白尿等表现时,应用糖皮质激素、免疫抑制剂仍是目前主要的治疗手段,但病情往往易迁延、反复,且存在不同程度的副作用。此外,由于众多炎性细胞因子构成的复杂网络及过度释放时形成的瀑布效应,使得针对单一炎性细胞因子的对抗措施在临床上难以取得预期的疗效,而多种抗体的联合搭配使用又显得不切实际。基于NF-κB对炎性细胞因子基因表达起着中心调控作用,因此,通过抑制上游转导通路NF-κB活化的抗炎治疗逐渐成为肾脏疾病治疗的新靶点。近年来随着中医药的深入研究和中医对MsPGN的病因和发病机制的更进一步认识,中医药治疗MsPGN取得了一定进展,并显示出中医药治疗该病有一定优势及潜能。中医学认为湿热在MsPGN发病过程中起着非常重要的作用,是促进肾脏病理损害,加速肾功能恶化的重要因素。处理好湿热证,对于控制病情,保护肾功能都很有意义。筋骨草为福建常用中草药,性味苦寒,具有清热燥湿的作用,其有效成分黄酮类化合物木犀草素具有抗炎、抑制变态反应、抗增殖等活性。根据上述理论,我们推测筋骨草总黄酮（TFA）可能对肾小球肾炎具有治疗作用。为此,我们设计了本研究。经过检索查新,本研究目前无相关报道。第二章实验研究目的：探讨TFA对MsPGN模型大鼠的治疗作用及可能的作用机制。体外观察TFA含药血清对LPS诱导的GMC增殖、ECM分泌及NF-κB/IκB信号转导途径的干预作用,旨在从细胞生物学及分子水平探讨TFA治疗MsPGN的可能机制,为其进一步开发利用提供一定的实验依据。方法：体内研究：采用改良慢性血清病法复制MsPGN大鼠模型,造模第5w末将尿蛋白阳性者随机分为模型对照组、雷公藤多苷组（0.018g·kg-1·day-1, TPG组）、TFA高剂量组（2.16g·kg-1·day-1）、中剂量组（1.08g·kg-1·day-1）、低剂量组（0.54g·kg-1·day-1）,另设正常对照组。于造模第6w开始给药,连续6w后,检测各组大鼠24h尿蛋白定量和血生化指标；采用化学比色法分别检测各组大鼠血清MDA含量及其调节酶SOD活性的变化；采用放射免疫分析法检测各组大鼠血清IL-1、TNF-κ的浓度；采用ELISA法检测大鼠血清TGF-β1的表达水平；采用免疫组化法检测各组大鼠肾小球中NF-κB p65的表达情况。光镜下观察各组大鼠肾小球系膜区情况及GMC和ECM积聚情况。体外研究：（1）大鼠每日灌胃2次,连续3d,末次给药1h后制备实验血清；（2）采用台盼蓝染色排斥法检测TFA不同浓度含药血清对细胞活力的影响。（3）据细胞活力实验和预实验结果确定TFA含药血清浓度,将同步于静止期GMC分为以下各组：①正常对照组：加入10%正常大鼠血清；②LPS组：加入LPS10μg/ml和10%正常大鼠血清；③10%TFA含药血清组：加入LPS10μg/ml+10%TFA含药血清；④5%TFA含药血清组：加入LPS10μg/ml+5%TFA含药血清；⑤2.5%TFA含药血清组：加入LPS10μg/ml+2.5%TFA含药血清。（4）干预24h、48h后,用MTT法检测GMC的增殖情况；采用ELISA法检测细胞上清液中FN、Col-Ⅳ、MCP-1的表达情况。对干预48h的GMC采用流式细胞术检测细胞周期和RT-PCR检测MMP-9mRNA、NF-κB mRNA和IκB mRNA的表达水平。结果：体内研究：（1）给药6w后,各治疗组较模型对照组尿蛋白明显降低（P<0.01或P<0.05）,而TFA高、中剂量组尿蛋白含量虽低于TPG组,但无统计学意义（P>0.05）。（2）与模型对照组相比,TFA干预性治疗后TP明显升高,而TG、Tch、BUN、Scr明显降低,（P<0.01或P<0.05）。（3）肾组织病理形态学观察模型对照组GMC明显增殖,基质增多、系膜区明显增宽、毛细血管受压变窄或消失,半定量分析结果显示模型对照组系膜区面积/毛细血管丛面积比值较正常对照组显着升高（P<0.01）；TFA干预性治疗后上述病理改变明显减轻（P<0.01或P<0.05）。（4）TFA干预性治疗后与模型对照组相比SOD活力明显提高,MDA、IL-1、TNF-α、TGF-β1、肾小球NF-κB p65的表达则明显降低（P<0.05或P<0.01）,且NF-κB核移位明显受到抑制。（5）相关性分析显示,NF-κB p65与IL-1、TNF-α、TGF-β1均呈显着正相关（r=0.566、r=0.669、r=0.598,P<0.05）。体外研究：（1）20%、10%、5%和2.5%浓度TFA含药血清组24和48h细胞活力均达95%以上,无明显细胞毒性。（2）TFA含药血清干预24h、48h后LPS诱导GMC增殖水平、细胞上清液中FN、Col-Ⅳ、MCP-1表达较LPS组明显降低（P<0.05或P<0.01）。干预48h后,与LPS组相比处于G1期的细胞比例、MMP-9 mRNA和IκB mRNA相对表达量明显增高,而S期细胞比例、NF-κB mRNA相对表达量均明显降低（P<0.05或P<0.01）。（3）相关性分析显示NF-κB mRNA与IκB mRNA、MMP-9 mRNA （r=-0.724、r=-0.781, P<0.05）,均呈显着负相关。结论：首次证实,TFA能降低MsPGN大鼠蛋白尿,保护肾功能,抑制GMC增殖及ECM积集,减轻肾小球损伤,提示TFA对MsPGN有一定治疗作用,其作用可能与TFA抗氧化作用,调控NF-κB/IκB信号转导途径,继而调控细胞周期和炎症因子（IL-1、TNF-α、TGF-β1、MMP-9、MCP-1）的表达有关。
胡秦[10]（2009）在《抗肾间质纤维化的中药体外筛选及机制研究》文中指出肾间质纤维化,以胶原等细胞外基质（ECM）过度沉积及其导致的正常肾组织结构破坏为特征,几乎是所有原发或继发肾脏疾病进展到终末期肾衰的共同途径,一直以来都是是严重威胁人类健康和导致高致死率的疾病之一。迄今为止,临床还没有很好的防治方法和手段,因而寻找有效的临床药物治疗是目前亟待解决的问题。本文在回顾和总结近20年文献研究的基础上,应用新建立的体外筛选模型（二维模型）,以大鼠NRK-49F肾间质成纤维细胞为研究对象,对有抗纤维化活性报道的中药复方、单味中药以及中药来源单体化合物的活性进行了系统的筛选,在筛选出有效化合物的基础上,从胶原分泌,细胞分化和细胞增殖等方面探讨有效单体化合物治疗肾间质纤维化的可能机制。体外筛选二维模型建立在转化生长因子β（TGF-β1）诱导成纤维细胞的ECM过量沉积,利用天狼星红染料染色胶原实现对胶原的定量分析的基础上。本文对该模型的培养条件进行探讨,发现TGF-β1在Ⅰ型胶原蛋白包被的96孔细胞培养板（BD）显着的诱导NRK-49F细胞的ECM的大量聚集,且无细胞单层结构的破坏,模型成功率为76.7%,组内标准变异系数小于<10%,因而可以作为研究二维模型的理想介面。在该模型上TGF-β1诱导成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白（?）COLA1（1）,COLA2（1）和内源性TGF-β1的表达上调,与临床常用纤维化诊断指标相吻合。通过文献调研,在对近20年中约300篇文献的回顾和整理分析的基础上选取22个中药复方,复方采用水提制备。二维模型的研究结果发现其中15个中药复方提取物,包括茵陈蒿汤,麻黄汤,益肝康冲剂,臌胀片,扶正化淤胶囊,益气活血方,小柴胡汤,清肝活血方,补中益气汤,补肾柔肝方,抗纤保肝汤,虎金片,柴苓汤,八味地黄丸,血隆冲剂在100μg／mL时显着的抑制ECM的聚集,且没有显着的细胞毒性。综合考虑单味中药在15个活性复方中的使用频率以及文献报道等因素,选取10个单味中药,采用甲醇提取制备。二维模型的实验研究显示3个单味中药大黄,黄芩和丹参的提取物具有体外抑制ECM聚集的作用,其1C50分别为66.8μg/mL,31.8μg/mL,51.8μg/mL,且没有明显的细胞毒性。对21个单体化合物的研究结果显示5个单体化合物（黄芩苷,黄芩素,大黄素,槲皮素,丹酚酸B）剂量依赖性的抑制ECM聚集而不呈现明显的细胞毒性。其IC50分别为黄芩苷45.9μM；黄芩素24.7μM；丹酚酸B5.0μM；大黄素13.6μM；槲皮素22.3μM。其中4个化合物（黄芩苷,黄芩素,丹酚酸B,大黄素）来源于大黄、黄芩和丹参。进一步探讨单体作用规律发现所有候选化合物中,黄酮类均具有较好的体外活性。对具有潜在活性的5个单体化合物（黄芩苷,黄芩素,大黄素,槲皮素,丹酚酸B）,采用荧光定量PCR,免疫荧光染色和Western blot对基因和蛋白表达进行分析发现,5个化合物在三维模型上均能抑制细胞节结的生成；均能显着的下调Ⅰ型胶原α1,α2的基因和蛋白表达；槲皮素,黄芩素,丹酚酸B,大黄素抑制a-SMA蛋白表达,提示它们可以作用于纤维细胞向纤维母细胞的分化。同时MTS细胞生存率实验和Brdu掺入实验结果显示,5个化合物均不同程度的抑制成纤维细胞增殖。对黄芩苷和黄芩素的量效关系研究结果显示：在20-80μM剂量范围内,黄芩苷和黄芩素剂量依赖性的拮抗TGF-β1诱导的ECM聚集,但对基础水平的ECM聚集无影响。黄芩苷和黄芩素显着的抑制细胞增殖,但此剂量范围内不引起显着的细胞凋亡和细胞毒性。同时,Western blot、荧光定量PCR从蛋白和基因水平证实黄芩素和黄芩苷时间和剂量依赖性的抑制Ⅰ型胶原的基因和蛋白表达。Western blot和SEAP报告基因实验发现,黄芩素和黄芩苷作用于TGF-p1-Smad依赖依赖通路,时间和剂量依赖性下调内源性TGF-β1表达,抑制Smad3蛋白的磷酸化。综上所述,本研究中采用新建立的体外纤维化筛选模型,确证15个中药复方,3个中药单味药和5个单体化合物的体外抗肾间质纤维化作用；证明活性化合物的抗纤维化作用是通过抑制胶原蛋白分泌沉积、抑制细胞增殖和抑制细胞分化等方面实现。本文的研究为从中药中寻找和发现新的抗纤维化候选药物提供了实验依据。
二、Inhibitory effect of tea polyphenals on transforming growth factor-β1 expression in rat with cyclosporine A-induced chronic nephrotoxicity（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Inhibitory effect of tea polyphenals on transforming growth factor-β1 expression in rat with cyclosporine A-induced chronic nephrotoxicity（论文提纲范文）
（2）甜菊苷对小鼠肾纤维化的抑制作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 一、研究背景 |
| 1 肾纤维化的研究概述 |
| 2 甜菊苷的来源和应用 |
| 二、课题研究思路 |
| 第一部分 甜菊苷抑制单侧输尿管结扎小鼠的肾纤维化作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 实验小结 |
| 第二部分 甜菊苷对LPS诱导肾小管上皮细胞间质转化的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 实验小结 |
| 第三部分 甜菊苷对TGF-β1刺激肾成纤维细胞增殖和分化的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 实验小结 |
| 第四部分 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 天然产物抗肾纤维化作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 缩写词表 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 |
| 致谢 |
（3）三酰基甘油结合石榴酸和枯茗醛制备的纳米制剂用于提高生物利用度和增强抗肝毒活性（论文提纲范文）
| Dedication |
| Acknowledgement |
| Abstract |
| 摘要 |
| List of Abbreviations |
| Chapter 1 Review of natural-based antihepatotoxic components and appropriate drugdelivery systems |
| 1.1 Introduction |
| 1.2 The structure and function of liver |
| 1.2.1 The structure of liver |
| 1.2.2 The function of liver |
| 1.2.3 Models for evaluating antihepatotoxic activity of natural bioativecompounds |
| 1.2.4 Drugs or toxins-induced liver disorders |
| 1.2.5 Hepatic metabolism of drugs |
| 1.2.6 Mechanistic action of hepatotoxicants |
| 1.2.6.1 Carbon tetrchloride |
| 1.2.6.2 Overview of mechanistic actions of other hepatotoxicants |
| 1.2.7 Liver function markers |
| 1.2.7.1 Aminotransferases |
| 1.2.7.2 Phosphatases |
| 1.2.7.3 γ-glutamine transpeptidase |
| 1.2.7.4 Bilirubin |
| 1.2.7.5 Total proteins |
| 1.2.7.6 Lactate dehydrogenase |
| 1.3 Natural components with anthepatotoxic activities |
| 1.4 Review of triacylglycerol-bound punicic acid (TPA) and cuminaldehyde (CuA) |
| 1.4.1 TPA |
| 1.4.1.1 Source |
| 1.4.1.2 Physico-chmical properties |
| 1.4.1.3 Extraction techniques |
| 1.4.1.4 Health-promoting properties |
| 1.4.1.4.1 Antitumor effect |
| 1.4.1.4.2 Antidiabetic and antiobesity activities |
| 1.4.1.4.3 Antioxidation and antiiinflammotion properties |
| 1.4.1.4.4 Other health benefits |
| 1.4.1.5 Pharmacokinetics and pharmaceutical applications |
| 1.4.1.6 Analytical techniques for TPA determination |
| 1.4.1.7 Current limitations of TPA and future prospects |
| 1.4.2 CuA |
| 1.4.2.1 Source |
| 1.4.2.2 Physico-chemical properties |
| 1.4.2.3 Extraction techniques |
| 1.4.2.4 Pharmacological effects |
| 1.4.2.4.1 Antidiabetic effect |
| 1.4.2.4.2 Anticancer effect |
| 1.4.2.4.3 Neuroprotective efficacy |
| 1.4.2.4.4 Antiinflammatory and antioxidation effects |
| 1.4.2.4.5 Antimicrobial and antifungal activities |
| 1.4.2.5 Pharmaceutics and pharmacokinetics applications |
| 1.4.2.6 Analytical methods for CuA determination |
| 1.4.2.7 Current limitations of CuA and potentials in the future works |
| 1.5 Novel colloidal drug carriers |
| 1.4.1 Liposomes |
| 1.4.2 Niosomes |
| 1.4.3 Self-emulsified nanoemulsion(SEN) |
| 1.4.4 Micelles |
| 1.4.4.1 Polymeric micelles |
| 1.6 Objectives and significance of the study |
| Chapte 2 Triacylglycerol-bound Punicic acid-loaded Lipid-based Formulations:Isolation, preparation, optimization and characterization |
| 2.1 Introduction |
| 2.2 Instruments,materials and reagents |
| 2.2.1 Instruments |
| 2.2.2 Materials and reagents |
| 2.3 Experimental design and methodology |
| 2.3.1 Quantitative analysis of TPA via dual-wavelength spectrophotometric method |
| 2.3.2 Isolation and identifiation of TPA |
| 2.3.3 Formulation and optimization of TPA-loaded niosomes(TPA-NS) |
| 2.3.3.1 Experimental design |
| 2.3.3.1 Characterization of TPA-NS |
| 2.3.3.1.1 Morphological characterization |
| 2.3.3.1.2 Size distribution characterization and stability assessment |
| 2.3.3.1.2 Fourier-transform infrared characterization of TPA-NS |
| 2.3.3.1.4 Entrament efficiency of TPA-NS |
| 2.3.3.2 In-vitro release and release kinetics of TPA |
| 2.3.4 Development,optimization and characterization of TPA nanoliposomes(TPA-NL) |
| 2.3.4.1 Morphology of optimized TPA-NL |
| 2.3.4.2 Characterization and stability analysis of TPA-NL |
| 2.3.4.3 Determination of %EE |
| 2.3.4.4 Fourter-transform infrared |
| 2.3.4.5 In-vitro release studies of TPA-NL |
| 2.3.5 Statistical analysis and model fitting |
| 2.4 Results and discussion |
| 2.4.1 Quantitative analysis of TPA |
| 2.4.2 Isolation, purification and identification of TPA |
| 2.4.3 Farmulation and optimization of TPA-NS |
| 2.4.3.1 Fitting of data to the model |
| 2.4.3.1.1 Effect of independent variables on droplet size |
| 2.4.3.1.2 Effect of independent variables on PDI |
| 2.4.3.1.3 Effect of independent variables on EE |
| 2.4.3.1.4 Datat Optimization and Model Validation |
| 2.4.4 Development and optimization of TPA-NL |
| 2.4.5 Morphological and physico-chemical characterization of optimized TPA-NSand TPA-NL |
| 2.4.6 FTIR characterization of optimized TPA-NS and TPA-NL |
| 2.4.7 Stability studies of optimized PA-NS and TPA-NL |
| 2.4.8 In-vitro release studies of TPA |
| 2.5 Summary |
| 2.5.1 Graphical summary |
| Chapter 3 Formulation optimization, characterization and in-Vitro evaluation ofcuminaldehyde-loaded lipid-derived nanocarriers |
| 3.1 Introduction |
| 3.2 Instruments, materials and reagents |
| 3.2.1 Instruments |
| 3.2.2 Materials and reagents |
| 3.3 Experimental design and methodology |
| 3.3.1 In-vitro quantification of CuA using analytical HPLC method |
| 3.3.2 Preparation and optimization of CuA self-emulsified- nanoemulsion(CuA-SEN) |
| 3.3.2.1 Box-Behnken design |
| 3.3.2.2 Preparation of CuA-SEN |
| 3.3.2.3 Percentage transmittance determition |
| 3.3.2.4 Evaluation of CuA-SEN |
| 3.3.2.5 Characterization of optimized CuA-SEN with FTIR |
| 3.3.2.6 Characterization of CuA-SEN morphology |
| 3.3.2.7 Droplet size,PDI and z-potential analysis |
| 3.3.2.8 Entrapment efficiency and loading capacity |
| 3.3.2.9 Stability study and cloud point measurement |
| 3.3.2.10 In-vitro drug release studies |
| 3.3.3 Formulation optimization and characterization of Cremophor-EL CuAmicelles(C-CuA-M) |
| 3.3.3.1 Formulation of C-CuA-M |
| 3.3.3.2 Morphological studies of C-CuA-M |
| 3.3.3.3 Physical characterization of C-CuA-M |
| 3.3.3.4 Determination of critical micelle concentration of Cremophor-EL |
| 3.3.3.5 Drug loading analysis |
| 3.3.3.6 Stability study of C-CuA-M |
| 3.3.3.7 In-vitro release studies of CuA |
| 3.3.4 Statistical analysis |
| 3.4 Results and discussion |
| 3.4.1 Quantification of CuA in-vitro |
| 3.4.2 Preparation and optimization of CuA-SEN |
| 3.4.3 Formulation optimization of C-CuA-M |
| 3.4.4 Characterization of CuA-SEN |
| 3.4.4.1 FTIR characterization of optimal CuA-SEN |
| 3.4.4.2 Physical characteristics of optimal CuA-SEN |
| 3.4.5 Characieriation of C-CuA-M |
| 3.4.5.1 Physico-chemical characterization of C-CuA-M |
| 3.4.6 Other parameters determination and stability studies of CuA-SEN andC-CuA-M |
| 3.4.7 Investigations of in-vitro release of CuA from CuA-SEN and C-CuA-M |
| 3.5 Summary |
| 3.5.1 Graphical summary |
| Chapter 4 Improved oral bioavailability and increased antihepatotoxic activities ofTriacylgly cerol-bound punicic acid and cuminaldehyde nanoformulations |
| 4.1 Introduction |
| 4.2 Instruments,materials and reagents |
| 4.2.1 Instruments |
| 4.2.2 Materia ls and reagents |
| 4.2.3 Experimental animals |
| 4.3 Experimental design and methodologies |
| 4.3.1 In vivo oral bioavailability studies |
| 4.3.1.1 Calibration of TPA estimation in vivo using dual-wavelength analyticalmethod |
| 4.3.1.2 In vivo quantitative HPLC analysis of CuA |
| 4.3.2 Determination of pharmacokinetic parameters |
| 4.3.2.1 Plosma pharrmacokinetics of TPA |
| 4.3.2.2 Estimation of plasma concenration of TPA |
| 4.3.2.3 In vivo pharmacokinetic investiation of CuA |
| 4.3.2.4 Determination of CuA concentation in plasma |
| 4.3.3 Determination of pharmacokinetic parameters |
| 4.3.4 In vivo evaluation of antioxidant, antiinflammation and antihepatotoxicactivities |
| 4.3.4.1 Evaluation of liver enzymes, TBIL and CAT |
| 4.3.4.2 Determination of hepatic endogenous antioxidants |
| 4.3.4.3 Determination of inflammatory markers |
| 4.3.4.4 Hitopathological evaluation |
| 4.3.5 Statistical analysis |
| 4.4 Results and discussion |
| 4.4.1 In vivo estimation of TPA |
| 4.4.2 In vivo quantification of CuA |
| 4.4.3 In vivo pharmacokinetics invesigations of TPA |
| 4.4.4 In vivo pharmacokinetics studies of CuA |
| 4.4.5 In vivo evaluation of antioxidant,antiinflammation and antihepatotoxic activities |
| 4.6 S Summary |
| 4.6.1 Graphical summary |
| Chapter 5 General conclusions and future works |
| 5.1 General conclusions |
| 5.2 Novelty/Innovations |
| 5.3 Future works suggestions |
| References |
| Publication |
（4）黄芩苷对类风湿关节炎模型小鼠的治疗作用和机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号及缩略语 |
| 主要试剂及来源 |
| 主要仪器设备 |
| 第一部分 黄芩苷对类风湿关节炎模型小鼠的治疗作用 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 黄芩苷对相关酶类的调节及对单核细胞状态的影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 介导黄芩苷疗效的相关细胞信号转导通路 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 英文论文全文1 |
| 英文论文全文2 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（5）槲皮素通过Nrf2通路对创伤性脑损伤后线粒体损伤的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 绪论 |
| 研究一、槲皮素可在TBI后激活Nrf2通路并保护线粒体损伤 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 研究二、Nrf2通路在槲皮素减轻TBI后线粒体破坏中的作用 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 硕士期间撰写及发表的论文及研究成果 |
| 硕士期闻所获奖励 |
| 致谢 |
（6）吡非尼酮对心脏成纤维细胞功能的影响及作用机制研究（论文提纲范文）
| 第一部分 吡非尼酮对心脏成纤维细胞功能的影响及其作用机制 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 转化生长因子β诱导基因22在心肌梗死组织中的表达变化、心脏成纤维细胞中的表达调控及功能 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 心脏成纤维细胞在心室重构中的地位和作用 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 发表文章情况 |
| 会议摘要 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）柴苓汤对环孢素A肾病大鼠a-SMA表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 柴苓汤对环孢素A 肾病大鼠肾功能及病理形态学的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 柴苓汤对环孢素A 肾病大鼠a-SMA 表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 柴苓汤对环孢素A 肾病大鼠TGF-β_1表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 柴苓汤对环孢素A 肾病大鼠ColⅢ表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述一 环孢素A慢性肾毒性机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药防治环孢素A慢性肾毒性的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）大黄有效部位及伟素对慢性环孢素肾病大鼠的防治研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第1部分 Rep及伟素对CCN大鼠的干预作用 |
| 1 实验材料及仪器 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第2部分 Rep及伟素对CCN大鼠的治疗作用 |
| 1 实验材料及仪器 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 全文总结 |
| 成果 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
（9）筋骨草总黄酮治疗系膜增生性肾小球肾炎的实验研究及其机制探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 理论研究 |
| 前言 |
| 1. 现代医学对MsPGN的认识 |
| 1.1 MsPGN的发病机理 |
| 1.2 MsPGN的病理特点 |
| 1.3 肾小球的系膜细胞和细胞外基质 |
| 1.4 MsPGN的治疗 |
| 1.5 治疗前景 |
| 2. MsPGN的中医药研究 |
| 2.1 中医对MsPGN病因病机的认识 |
| 2.2 中医辨证分型 |
| 2.3 湿热与MsPGN病理变化的机制探讨 |
| 2.4 临床及实验研究 |
| 2.5 中医治疗的机理研究 |
| 2.6 思考与展望 |
| 3. NF-κB与肾脏疾病 |
| 3.1 NF-κB的生物学特征 |
| 3.2 NF-κB的活化及其信号转导 |
| 3.3 NF-κB的功能 |
| 3.4 NF-κB与系膜增生 |
| 3.5 NF-κB与小管间质 |
| 3.6 NF-κB与纤维化 |
| 3.7 NF-κB与单纯性肾病综合征 |
| 3.8 结语 |
| 4. 筋骨草的研究现状 |
| 4.1 筋骨草的化学成分研究 |
| 4.2 筋骨草及其黄酮提取物的药理、临床特性 |
| 4.3 立题依据 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验研究 |
| 前言 |
| 第一部分 筋骨草总黄酮治疗系膜增生性肾小球肾炎的实验研究 |
| 实验一 TFA对MsPGN大鼠治疗作用的实验研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 TFA对MsPGN大鼠氧化应激及相关因子表达的干预作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 筋骨草总黄酮含药血清对大鼠肾小球系膜细胞及NF-κB/IκB信号转导途径的影响 |
| 实验一 TFA含药血清对肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 TFA含药血清对肾小球系膜细胞外基质的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 实验三 TFA含药血清对NF-κB/IκB信号转导途径的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）抗肾间质纤维化的中药体外筛选及机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 文献综述 |
| 前言 |
| 第一章 肾间质纤维化体外模型的建立 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第二章 抗肾间质纤维化的中药筛选及作用研究 |
| 第一节 文献调研及供试中药的选择 |
| 1. 实验方法 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第二节 中药复方抗肾间质纤维化作用研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第三节 中药单味药抗肾间质纤维化作用研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第四节 中药单体化合物抗肾间质纤维化作用研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第三章 单体化合物抗肾间质纤维化的机制研究 |
| 第一节 5种单体化合物对细胞增殖、分化和胶原分泌的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第二节 黄芩苷和黄芩素的量效关系研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第三节 黄芩苷和黄芩素对TGF-β-Smad信号通路的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、Inhibitory effect of tea polyphenals on transforming growth factor-β1 expression in rat with cyclosporine A-induced chronic nephrotoxicity（论文参考文献）
- [1]Artemisinin and artemisinin derivatives as anti-fibrotic therapeutics[J]. David Dolivo,Pamela Weathers,Tanja Dominko. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2021(02)
- [2]甜菊苷对小鼠肾纤维化的抑制作用及其机制研究[D]. 沈微. 苏州大学, 2020(02)
- [3]三酰基甘油结合石榴酸和枯茗醛制备的纳米制剂用于提高生物利用度和增强抗肝毒活性[D]. MICHAEL ADU-FRIMPONG. 江苏大学, 2019(12)
- [4]黄芩苷对类风湿关节炎模型小鼠的治疗作用和机制[D]. 王春晓. 山东大学, 2019(09)
- [5]槲皮素通过Nrf2通路对创伤性脑损伤后线粒体损伤的保护作用研究[D]. 李翔. 南京大学, 2017(02)
- [6]吡非尼酮对心脏成纤维细胞功能的影响及作用机制研究[D]. 史强. 北京协和医学院, 2012(11)
- [7]柴苓汤对环孢素A肾病大鼠a-SMA表达的影响[D]. 王香婷. 河北医科大学, 2011(10)
- [8]大黄有效部位及伟素对慢性环孢素肾病大鼠的防治研究[D]. 王妍春. 南方医科大学, 2010(12)
- [9]筋骨草总黄酮治疗系膜增生性肾小球肾炎的实验研究及其机制探讨[D]. 南丽红. 南京中医药大学, 2010(12)
- [10]抗肾间质纤维化的中药体外筛选及机制研究[D]. 胡秦. 中国协和医科大学, 2009(12)