一、培养软骨同生长板的比较研究（论文文献综述）
谢艳,李无阴,邢伟鹏,裴圆圆,王娜[1]（2022）在《抑制生长板软骨细胞凋亡药物筛选及白藜芦醇延迟大鼠骨骺闭合的作用》文中研究表明背景:骨骺闭合长骨停止生长,骨骺闭合的直接诱因是生长板软骨细胞的凋亡。有报道芳香化酶抑制剂可以抑制雌激素的生成,而骨骼生长的停止是由于骨骺闭合引起的,因此推断芳香化酶抑制剂可以抑制生长板软骨细胞凋亡,延迟骨骺闭合。目的:比较几种芳香化酶抑制剂（白藜芦醇、鹰嘴豆素A、亚麻木酚素）抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡的效果,并对白藜芦醇延迟大鼠骨骺闭合促进长骨生长的作用进行验证。方法:解剖大鼠胫骨及股骨生长板软骨,二步酶消化法体外分离获得生长板软骨细胞并进行培养,分别利用倒置相差显微镜及Ⅱ型胶原免疫荧光实验对软骨细胞进行形态学观察和鉴定。然后用白细胞介素1β诱发生长板软骨细胞凋亡,分别加入含有10,20,40,60μmol/L的白藜芦醇培养液,5,10,20,30μmol/L的鹰嘴豆素A培养液,1,10,20,40μmol/L的亚麻木酚素培养液进行培养,比较各个浓度的药物对生长板软骨细胞凋亡的影响。将筛选出效果最好的药物白藜芦醇给予大鼠灌胃,观察其对大鼠胫骨平台骨骺闭合及对长骨生长的影响。结果与结论:（1）适宜浓度的白藜芦醇、鹰嘴豆素A、亚麻木酚素均可以不同程度地抑制生长板软骨细胞凋亡,最佳抑制细胞凋亡的药物浓度分别为40,10,20μmol/L,其中40μmol/L白藜芦醇抑制生长板软骨细胞凋亡的效果最好;（2）而用40 mg/kg白藜芦醇给予大鼠灌胃处理,发现可以延迟大鼠胫骨平台的骨骺闭合促进长骨生长,为骨骼生长争取更长时间从而促进发育期骨骼增长。
王亦维,李瑞祺,郑朋飞[2]（2022）在《儿童骺板损伤组织工程学治疗研究进展》文中研究说明儿童骺板损伤非常常见, 骨折、感染、恶性肿瘤或医源性损伤等原因均可导致, 损伤后易引起生长阻滞、成角或旋转畸形, 严重影响儿童的身心健康。目前临床骨桥切除术结合相应材料填充的治疗方法成功率低。采用软骨组织工程技术构建具有生物活性的骺板软骨成为治疗儿童骺板损伤新的研究方向。因此, 现主要从组织工程三要素:种子细胞、生长因子、组织工程支架角度对目前骺板软骨的再生研究进行综述。
卢承印,谢艳,李无阴,王庆丰,张云芳[3]（2022）在《7-羟基黄烷酮抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡及对胫骨生长的影响》文中进行了进一步梳理目的筛选7-羟基黄烷酮抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡的最适药物浓度并观察其对大鼠骨骺闭合和胫骨生长的影响。方法解剖大鼠胫骨生长板软骨,体外分离生长板软骨细胞并进行鉴定。然后采用IL-1β诱发软骨细胞凋亡,分别加入含有10、20、40、60μM的7-羟基黄烷酮培养液进行培养,采用MTT法初步观察各浓度抑制软骨细胞凋亡效果,筛选出最佳药物浓度。随后采用流式细胞仪对筛选出的最佳浓度进行验证。此外给予大鼠100 mg/kg 7-羟基黄烷酮灌胃,观察其对骨骺闭合及胫骨生长的影响。结果软骨细胞免疫荧光鉴定结果显示,分离培养的细胞符合软骨细胞的生物学特征。MTT法实验结果显示,10、20、40、60μM 7-羟基黄烷酮均可以不同程度地抑制生长板软骨细胞凋亡,其中抑制软骨细胞凋亡的最佳药物浓度为40μM,通过流式细胞仪进一步验证显示40μM 7-羟基黄烷酮抑制细胞凋亡作用明显,且效果优于阳性对照组。此外,100 mg/kg 7-羟基黄烷酮灌胃结果显示其能够延缓骨骺闭合并促进大鼠胫骨生长。结论本次研究结果显示,7-羟基黄烷酮能够抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡,最适药物浓度为40μM。此外,体外实验证实给予大鼠灌胃7-羟基黄烷酮的确能够延缓骨骺愈合,促进胫骨生长。
余建平,王小健,安雪军,贾中伟,郭松佳,路晓,郭秀生,苏云星[4]（2021）在《慢性肾功能不全幼鼠胫骨生长板软骨细胞糖原合成酶激酶3β表达水平变化对生长板发育的影响》文中指出目的观察慢性肾功能不全（chroic renal insufficiency, CRI）幼鼠胫骨生长板软骨细胞糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β, GSK3β）表达水平变化对生长板发育的影响。方法将40只4周龄雄性SD幼鼠, 按随机数字表法平均分为CRI组（腺嘌呤150 mg·kg-1·d-1灌胃, n=20）和对照组（同剂量蒸馏水灌胃, n=20）, 连续灌胃6周后处死全部幼鼠, 取双侧胫骨制作组织学切片、番红固绿染色后比较两组幼鼠胫骨近端生长板宽度, 应用免疫组织化学技术检测GSK3β表达部位及水平;提取两组胫骨生长板软骨细胞进行体外培养至第3代, 观测软骨细胞内GSK3β、磷酸化GSK3β（p-GSK3β）、Wnt/β通路关键蛋白β联蛋白（β-catenin）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13, MMP-13）表达水平, 裂解细胞后应用蛋白质印迹法技术检测GSK3β、p-GSK3β、β-catenin、MMP-13表达水平。两组间比较采用成组t检验。结果幼鼠胫骨组织学切片显示CRI组生长板相对宽度为（0.52±0.14）, 对照组为（1.00±0.07）, 组间比较差异有统计学意义（P<0.001）。幼鼠胫骨组织学切片免疫组织化学结果显示CRI组软骨细胞GSK3β评分为（1.8±0.4）分, 对照组为（7.1±2.2）分, 组间差异有统计学意义（P<0.001）。体外细胞实验免疫组织化学结果显示CRI组软骨细胞内GSK3β评分为（0.94±0.32）分, 对照组为（5.63±1.71）分, 组间比较差异有统计学意义（P<0.001）;CRI组p-GSK3β评分为（4.97±1.10）分, 对照组为（1.58±0.51）分, 组间比较差异有统计学意义（P<0.001）;CRI组β-catenin评分为（5.11±2.03）分, 对照组为（1.43±0.31）分, 组间比较差异有统计学意义（P<0.001）;CRI组MMP-13评分为（6.25±2.33）分, 对照组为（2.57±1.13）分, 组间比较差异有统计学意义（P<0.001）。蛋白质印迹法结果显示, CRI软骨细胞内GSK3β表达水平为（0.13±0.04）, 对照组为（0.38±0.11）, 组间比较差异有统计学意义（P<0.001）;CRI软骨细胞内p-GSK3β表达水平为（0.52±0.18）, 对照组为（0.19±0.08）, 组间比较差异有统计学意义（P<0.001）;CRI组软骨细胞内β-catenin表达水平为（1.03±0.21）, 对照组为（0.41±0.17）, 组间比较差异有统计学意义（P<0.001）;CRI组软骨细胞内MMP-13表达水平为（0.56±0.18）, 对照组为（0.20±0.05）, 组间比较差异有统计学意义（P<0.001）。结论肾功能不全幼鼠胫骨生长板软骨细胞内GSK3β表达减少、其失活状态蛋白p-GSK3β表达明显增多, 导致Wnt/β通路过度激活, 生长板软骨细胞加速分化, 生长板出现闭合趋势。
郭畅,谢艳,李冬冬,殷娜,张丽[5]（2021）在《白藜芦醇抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡及对胫骨生长的影响》文中进行了进一步梳理目的探索白藜芦醇对IL-1β诱导的生长板软骨细胞凋亡的影响,以及筛选白藜芦醇作用的最适浓度,并对白藜芦醇延迟大鼠骨骺闭合、促进长骨生长的作用进行验证。方法取4周龄SD大鼠,对其生长板软骨细胞进行分离及培养,Ⅱ型胶原免疫荧光实验进行细胞鉴定。将软骨细胞随机分为9组:正常对照组（普通培养基）、模型对照组（含20 ng/mL IL-1β）、阳性对照组（含20 ng/mL IL-1β+5μmol/L来曲唑）、二甲基亚砜（DMSO）对照组（培养基里加入白藜芦醇的溶解物DMSO）、实验1组（只加入40μmol/L白藜芦醇）、实验2组至实验5组（分别含20 ng/mL IL-1β+10、20、40、60μmol/L白藜芦醇）。MTT比色法筛选白藜芦醇抑制生长板软骨细胞凋亡、促进细胞增殖的最适浓度,流式细胞仪检测最适浓度的白藜芦醇抑制软骨细胞凋亡情况;并用适量浓度的白藜芦醇给予大鼠灌胃,观察其对大鼠胫骨平台骨骺闭合及胫骨生长的影响。结果实验分离培养获得大鼠生长板软骨细胞。MTT法检测结果显示,与正常对照组比较,模型对照组细胞增殖能力显着降低（P<0.05）。与模型对照组比较,来曲唑和不同浓度白藜芦醇均能拮抗IL-1β引起的细胞凋亡,差异有统计学意义（P<0.01）,白藜芦醇的干预效果优于来曲唑,且最佳浓度为40μmol/L。流式分析结果显示,模型对照组细胞凋亡率显着高于正常对照组（P<0.05）,40μmol/L的白藜芦醇能够降低IL-1β诱导的大鼠生长板软骨细胞的凋亡比例,且干预效果优于阳性对照组来曲唑。100 mg/kg给予大鼠灌胃白藜芦醇可以延迟大鼠胫骨平台骨骺闭合且促进胫骨生长。结论 40μmol/L白藜芦醇能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,而100 mg/kg白藜芦醇给予大鼠灌胃可以延迟大鼠胫骨平台的骨骺闭合,为骨骼生长争取更长时间从而促进发育期骨骼增长。
赵常红,李世昌,孙朋,徐帅,方幸[6]（2021）在《不同方式运动对生长期大鼠FGF、IGF信号及软骨内成骨的影响》文中研究表明目的探索不同方式运动对生长期大鼠成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor, FGF）、胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor, IGF）信号通路相关分子表达及软骨内成骨的影响。方法将生长期大鼠随机分为对照组、游泳组、跑台组和下跳组,进行6周的不同方式运动,利用软骨细胞原代分离、培养和染色技术,观察软骨细胞体外增殖,生长板切片染色,观察软骨细胞增殖肥大;利用RT-PCR、Western blot检测细胞因子mRNA和蛋白表达。结果 （1）跑台运动和下跳运动有助于促进软骨细胞增殖和肥大,增加生长板肥大层的宽度,下跳运动更为明显;（2）FGF2 mRNA表达水平与对照组相比,游泳组差异无统计学意义（P>0.05）,跑台组和下跳组显着降低（P<0.05）;成纤维细胞生长因子受体1（fibroblast growth factor receptor, FGFR1）mRNA表达水平与对照组相比,跑台组和下跳组显着降低（P<0.01）;成纤维细胞生长因子受体3（fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3）mRNA表达水平与对照组相比,跑台组和下跳组显着降低（P<0.01）;IGF-1 mRNA表达水平与对照组和游泳组相比,跑台组和下跳组均显着上调（P<0.05）;IGF-1信号通过胰岛素样生长因子-1受体（Insulin like growth factor-1 receptor, IGF1R）mRNA表达水平与对照组相比,下跳组有统计学差异（P<0.05）。FGF2蛋白表达水平与对照组相比,游泳组无统计学差异（P>0.05）,跑台组和下跳组都显着降低（P<0.01）;IGF-1蛋白表达水平与对照组相比,游泳组无统计学差异（P>0.05）,跑台组和下跳组显着增加（分别为P<0.05和<0.01）,与游泳组相比,跑台组和下跳组均显着性增加（P<0.01）。结论下跳运动通过FGF、IGF信号通路,促进生长期大鼠生长板软骨细胞增殖与肥大,有利于软骨内成骨。
王小健,李荣山,田伟,郑刚,毕宏,王艳红,董丽娜,郭松佳,路晓,周晓霜[7]（2021）在《慢性肾衰竭幼鼠胫骨生长板软骨细胞初级纤毛高表达加速软骨细胞分化的机制研究》文中提出目的探讨慢性肾衰竭（chronic renal failure,CRF）幼鼠胫骨生长板软骨细胞初级纤毛高表达加速软骨细胞分化的机制。方法选取雄性4周龄SD大鼠40只,体重（98±3）g,随机分为对照组（蒸馏水,n=20）和CRF组（腺嘌呤150 mg·kg-1·d-1,n=20）,连续灌胃6周后处死幼鼠,采用胫骨制作组织学切片比较生长板长度,免疫荧光检测软骨细胞初级纤毛表达率、Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β联蛋白（β-catenin）表达水平;体外培养两组幼鼠胫骨生长板软骨细胞至第3代,免疫荧光检测软骨细胞初级纤毛表达率及印度刺猬蛋白（Indian hedgehog,IHH）和Wnt/β-catenin通路拮抗蛋白糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK3β）表达水平;应用免疫共沉淀检测IHH与GSK3β之间的作用关系。结果与对照组相比,CRF组组织学切片生长板相对长度变短[（0.51±0.11）比（1.00±0.08）,t=16.11,P<0.001],软骨细胞初级纤毛表达率增高[（26.3±5.5）%比（7.6±1.9）%,t=14.37,P<0.001],软骨细胞β-catenin蛋白表达增多[（7.1±2.0）分比（3.6±1.0）分,t=7.10,P<0.001]。体外培养结果显示,与对照组相比,CRF组软骨细胞初级纤毛表达率增高[（31.4±8.2）%比（12.5±3.1）%,t=9.64,P<0.001],IHH蛋白表达增多[（1 360±270）比（310±84）,t=16.61,P<0.001],而两组GSK3β蛋白表达差异无统计学意义[（850±195）比（780±140）,t=1.30,P=0.200]。免疫共沉淀检测结果显示,CRF组GSK3β蛋白与IHH蛋白在软骨细胞内存在直接相互作用。结论 CRF幼鼠胫骨生长板软骨细胞初级纤毛表达增多,相关蛋白IHH表达增多,IHH蛋白与Wnt/β-catenin信号通路拮抗蛋白GSK3β存在直接作用,导致Wnt/β-catenin信号通路激活、软骨细胞加速分化,最终导致生长板出现闭合趋势。
王朋涛,谢艳,杨艳梅,孔凡国,王娜,张海龙[8]（2021）在《来曲唑抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡的最适药物浓度筛选》文中进行了进一步梳理目的:筛选来曲唑（letrozole,LE）抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡的最适药物浓度。方法:解剖取大鼠胫骨及股骨生长板软骨,采用二步酶消法体外分离获得生长板软骨细胞并进行培养,分别利用倒置相差显微镜及Ⅱ型胶原免疫荧光实验对生长板软骨细胞进行形态学观察和鉴定。用IL-1β诱发生长板软骨细胞凋亡,分别加入药物浓度为2.5、5、10、15、20μmol·L-1来曲唑的培养基进行培养,流式细胞仪检测来曲唑抑制细胞凋亡情况。同样以IL-1β诱发生长板软骨细胞凋亡,分别加入药物浓度为1、2.5、5、10、15μmol·L-1来曲唑的培养基进行培养,MTT法筛选来曲唑抑制细胞凋亡的最适药物浓度。结果:来曲唑浓度为2.5、5、10、15μmol·L-1时均可以不同程度抑制生长板软骨细胞凋亡。模型对照组细胞OD值较正常对照组降低（P <0.01）。DMSO组与非造模组与正常对照组细胞OD值差异无统计学意义。结论:药物浓度为2.5μmol·L-1的来曲唑抑制生长板软骨细胞凋亡效果最好,可以做为今后其他抑制细胞凋亡药物的阳性对照药物。
李桥[9]（2021）在《犬缺血性骨软骨病细胞凋亡与基质紊乱的机制研究》文中研究表明骨软骨病（osteochondrosis,OC）是以软骨内骨化发生局灶性紊乱为特征的软骨疾病。通常引起人和动物关节疼痛和功能障碍等临床症状。OC患者初期临床症状不明显,导致其早期诊断困难。发展到中后期却治疗困难。关于OC的病因学的研究集中在缺血性生长软骨损伤,主要表现为细胞大量坏死或凋亡,软骨基质胶原和蛋白聚糖降低。然而,这种基质的主要成分和微观结构的变化规律还不明确,引起这种病变的潜在生物学机制也还不清楚。目前大多数关于OC的研究集中在手术切除的骨软骨碎片的组织学变化,以探讨其发病机制。然而,这些处于疾病后期的软骨碎片不能代表原发性OC疾病特征。犬和人OC的发生存在着高度相似性,包括临床表现、好发部位和影像学的改变以及晚期病变的组织学表现,表明他们可能有潜在共同的发病机制。因此,本研究旨在建立犬早期缺血性骨软骨病的基础上,探索其发生的潜在机制,有助于寻找动物和人OC发病早期的诊断生物标志物和新的防治策略。1.缺血诱导犬骨软骨病人和动物的软骨管内血管供应存在于骺生长软骨发育的早期阶段的有限时间内。在生长过程中,位于软骨管中段和远端的软骨管血管随着骨化前沿的推进与软骨下骨的血管形成吻合。当血管吻合发生紊乱时,软骨内骨化不能正常进行,从而导致骨软骨病的发生。软骨管血管的供血障碍在OC发生中起重要作用。因此,研究人员常通过阻断骺生长软骨的血液供应,诱导OC的发生。诱导性生长软骨缺血方法取决于软骨管血管的走向。基于本实验室前期的犬微血管灌注结果,我们发现幼犬股骨髁软骨管血管比滑车软骨管血管长、密度小;而股骨内侧髁软骨管血管比外侧髁软骨管血管长、密度小且分支较少。因此,与股骨滑车和外侧髁相比,犬股骨内侧髁是诱发缺血性软骨损伤的合适部位。本研究于犬股骨内侧髁的远轴侧行全层软骨切除,阻断软骨膜源血供以诱导OC,对侧肢内侧髁做健康对照;术前及术后6、10、20和30 d,分别进行X线影像学检查,评估骺生长软骨的钙化情况;术后6和30 d,分别随机选取6只犬,手术采集膝关节股骨髁软骨组织,采用HE染色、番红固绿染色和甲苯胺蓝染色,对其进行组织学评估;TUNEL染色检测软骨细胞凋亡情况;扫描电镜观察软骨胶原微观形态变化;拉曼光谱学检测软骨组成成分变化。结果显示:术后6、10、20与30 d,膝关节X影像学检查可见OC组犬的股骨远端内侧髁局部缺损随时间的增加而显着降低。术后6 d软骨的组织学观察,OC组出现了典型的缺血性软骨坏死病变,坏死软骨管内血管完整性缺失,软骨管周围部分软骨细胞核消失或胞核胞浆浓缩、胞浆呈嗜酸性等细胞变化;番红固绿及甲苯胺蓝染色显示软骨基质染色变浅,在坏死软骨管周围区域表现更为明显;软骨中间层与深层区软骨细胞出现大量凋亡。术后30 d,软骨细胞与软骨基质的病变更为显着;软骨细胞凋亡从深层区逐渐进展到浅层区;扫描电镜观察到软骨基质胶原出现大量紊乱;拉曼光谱主要组成成分分析结果显示,OC组软骨中蛋白聚糖与胶原相关峰的病变主要集中在中间层与深层。可见软骨细胞凋亡与基质紊乱诱导了OC的发生。2.基于Label free蛋白组学技术的犬骨软骨病差异表达蛋白分析在人与动物的正常生长板软骨和/或骺软骨中,软骨管随机体生长与发育会发生生理性退化。主要表现为软骨管血管退化、消失,小管间充质细胞分化为软骨细胞,最终小管被基质填充,但邻近的软骨细胞未出现异常。病理状态下,早期缺血性OC主要表现为软骨管周围细胞坏死（或凋亡）以及基质的紊乱,可发展为剥脱性骨软骨病（osteochondrosis dissecans,OCD）,也可自愈。这说明生长板软骨中特定的生物学物质可能参与了缺血性OC的发生与发展的调节。本研究应用蛋白质组学技术寻找差异表达蛋白,以探索骨软骨病潜在的分子生物学机制。术后30 d,本研究对OC组和对照组的骺生长软骨相近部位进行全层软骨采样（约3 mm）,采用Label free蛋白组学技术对软骨样本进行差异表达蛋白分析。使用ELISA方法对蛋白质组学的结果进行了验证。对照组与OC组共获取1369种蛋白,对鉴定到的蛋白进行差异表达筛选,OC组与对照组相比,共获得差异蛋白78种,其中显着上调差异蛋白31种,显着下调差异蛋白47种。ELISA验证结果与蛋白组学测序结果高度一致。部分差异蛋白（Htr A1、POSTN、S100A4、IGFBP5、PEDF、ALP和FⅩⅢ等）参与了细胞外基质紊乱的调节。Htr A1、S100A4和Fis等蛋白参与了细胞凋亡。其中,OC软骨中的Htr A1（一种分泌型丝氨酸蛋白酶）水平显着升高。据报道,Htr A1参与细胞外基质的降解,同时调控细胞凋亡。因此,我们推测Htr A1可能通过诱导软骨细胞凋亡与基质紊乱在OC疾病发生中发挥重要作用。3.Htr A1在骨软骨病发生中的作用本试验分离原代犬的生长板软骨细胞,并用免疫荧光进行鉴定。构建了Htr A1过表达质粒pc DNA3.1（+）-Htr A1。使用不同剂量Htr A1过表达质粒（1、3和6μg/m L）转染犬的原代软骨细胞。流式细胞术检测Htr A1过表达诱导软骨细胞凋亡变化;基因和蛋白水平检测与凋亡相关的XIAP/caspase 9/caspase 3信号通路的变化;检测细胞外基质主要组成成分（collagen II和aggrecan）和基质金属蛋白酶（ADAMTS4和ADAMTS5）基因的表达。培养骺生长板软骨外植体,不同剂量Htr A1重组蛋白组（0.1、1和5μg/m L）作用软骨外植体24 h,进行HE染色、番红固绿染色和甲苯胺蓝染色组织学评估;扫描电镜观察软骨胶原微观形态变化;拉曼光谱学检测软骨组成成分变化;检测细胞凋亡和基质紊乱相关基因与蛋白表达的变化。这些研究确定Htr A1在诱导骨软骨细胞凋亡和基质紊乱中的作用,阐明OC发生发展的分子生物学机制。原代软骨细胞培养试验结果显示,不同剂量过表达Htr A1（1、3和6μg/m L）均显着诱导了软骨细胞凋亡,呈剂量依赖性;过表达Htr A1通过激活XIAP/caspase9/caspase 3信号通路诱导了软骨细胞凋亡;过表达Htr A1显着升高了ADAMTS4和ADAMTS5基因的表达,显着降低了细胞外基质主要组成成分（collagen II和aggrecan）基因和蛋白的表达。表明过表达Htr A1可以诱导软骨细胞凋亡与细胞外基质紊乱。软骨外植体研究表明,中剂量和高剂量的重组蛋白Htr A1（1和5μg/m L）)可诱导软骨OC样病变,且呈剂量依赖性。外植体组织学分析显示,中剂量和高剂量Htr A1重组蛋白组中可观察到软骨管和周围软骨细胞大量坏死。同时,软骨外植体组织基质染色较浅,在坏死软骨管周围区域尤为明显。扫描电镜观察显示,Htr A1重组蛋白组的全层软骨（浅层、中间层和深层）胶原分布均出现一定程度紊乱,甚至有明显的断裂现象。这与前一部分中OC软骨中间层与深层的胶原微观形态学变化十分相似。拉曼光谱技术检测到Htr A1重组蛋白处理组软骨主要成分蛋白聚糖和胶原的降低。中剂量和高剂量的重组蛋白Htr A1显着降低了软骨外植体基质相关蛋白collagen II和aggrecan的表达。这些试验证实,异常升高的Htr A1可诱导软骨细胞凋亡和基质紊乱,进而促进OC的发生。综上所述,本研究通过阻断犬股骨远端骺生长软骨的局部血液供应,成功地诱导早期缺血性骨软骨病的发生。应用Label free蛋白质组学技术寻找到生长板软骨中特定的生物学物质Htr A1。通过原代软骨细胞与生长板软骨外植体培养,最终确定了Htr A1在诱导软骨细胞凋亡和基质（胶原和蛋白聚糖）发生紊乱中的作用,阐明OC发生发展的分子生物学机制。
黄杨[10]（2021）在《关节钙化软骨层通透性观测以及T型钙离子通道介导其发育的机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景骨关节炎（osteoarthritis,OA）作为一种退行性关节疾病在临床上十分常见,常导致患者关节疼痛、活动受限甚至肢体残疾。OA发病机制复杂,但是作为一种累及整个滑膜关节的炎性疾病已是共识,而炎症的起始及循环扩大的过程尚不清楚。近年研究表明,OA的病因有可能来自软骨下骨,始发于软骨下骨的轻微炎症,在没有干预的情况下继续引发了软骨的炎症,然后不断的形成了炎症的正反馈循环,最终导致OA的各种病理和临床表现。如果能够在其炎症早期阻断这种循环,即可能够大大延缓OA的进程。生理状态下,关节软骨和软骨下骨之间缺乏交流,处于截然不同的两种微环境中。关节软骨内无血供,乏氧;软骨下骨血供丰富,有氧。钙化软骨层（calcified cartilage zone,CCZ）是位于关节软骨与软骨下骨之间的一层致密的界层结构,与毗邻组织连接处形成标志型的线性结构,即软骨侧的潮线（tide mark,TM）和骨侧的粘合线（cement line,CL）。钙化软骨层拥有的特殊形貌结构、组成成分赋予了钙化层独一无二的力学特性,使得关节在运动过程中,来着软骨的巨大力学冲击在钙化层得以衰减,还能够将来自软骨的剪切力变为压应力往软骨下骨传递。除此之外,钙化层还具有重要的屏障作用,这种屏障作用的缺失将开启了骨—软骨之间非正常的对话机制,其结果是引发了OA。然而,我们对于这一领域知之甚少,既往研究结果充满争议。因此,我们首先运用了各种技术手段以及模型来探索钙化层的屏障功能。但是要彻底明白钙化层的各种功能,还需要从钙化层的发生、发育的着手,从而过渡到理解病理状态下其重塑的机制。在钙化层形成过程中,我们认为软骨组织也经历了一个类似的软骨内成骨的过程,但是这一过程和完整的软骨内成骨又有一定的区别。无论如何,在软骨—骨（钙化层）转换过程中,软骨细胞肥大化、凋亡与转分化是软骨内骨化进程中的重要一环。大量证据表明,电压依赖性钙通道（voltage-dependent calcium channel,VDCC）广泛表达在骨软骨发育的各个阶段,并且这种时空特异性的分布对于骨软骨发育具有决定性作用。据此,本课题首先设计了一系列新的实验方案及技术手段,用于探查钙化层的通透性,旨在揭开钙化层的通透性在软骨发育,以及发生OA时的变化特点。然后以电压依赖型钙离子通道为切入点,进一步探究钙化层发育、重塑的分子机制。实验方法第一部分:原位观测活体小鼠关节成熟/不成熟钙化层的通透性1.1-8月龄小鼠钙化层组织学观察24只Balb/c雌性小鼠（1-8月龄,3只/月龄）,二氧化碳处死后对膝关节样本常规组织学处理,然后进行苏木精-伊红（HE）染色、番红O/固绿染色,显微镜拍照观察。Image J软件测算小鼠软骨厚度（软骨表面至潮线的距离）,钙化层的厚度（潮线至粘合线的距离）2.小鼠固定装置设计制造采用L型不锈钢板,在合适的位置安装两个机械臂。一个固定小鼠大腿,另一个固定自制的穿孔塑料培养皿。小鼠膝关节股骨髁暴露后穿过培养皿小孔,周围用胶水封闭。3.活体小鼠钙化层通透性观察实验84只Balb/c雌性小鼠分为未成熟钙化层组（1月龄,42只）和成熟钙化层组（6月龄,42只）,用罗丹明B溶液和四甲基罗丹明异硫氰酸葡聚糖溶液（TRITC-葡聚糖）作为示踪剂进行通透性测试。然后将动物分为4个亚组:成熟CCZ+罗丹明B、成熟CCZ+TRITC-葡聚糖、未成熟CCZ+罗丹明B、未成熟CCZ+TRITC-葡聚糖。扩散时间为1min、15min、30min、1h和2h。直接处死小鼠取下膝关节股骨远端样本（0min）作为空白对照,而股骨远端浸泡在罗丹明B或TRITC-葡聚糖中72h作为阳性对照。4.硬组织不脱钙荧光观测技术以及图像处理收集小鼠膝关节样本以后依次进行如下处理:冻干脱水、塑料包埋、切割打磨、共聚焦显微镜扫描、DAPI和荧光素钠复染、共聚焦显微镜二次扫描、两次扫描图像拟合。最后进行荧光值定位定量分析以及统计检验。第二部分:基于Mirco-CT和菲克定律观测人膝骨关节炎软骨钙化层的通透性1.OA样本收集和预处理根据纳入、排除标准,入选重度膝骨关节炎患者3例,待全膝关节置换手术完成后,立即用冰盒转移样本,根据关节软骨表面情况,钻取直径8mm的骨软骨柱（0-1级或者4级）。软骨下骨为基底面置入放入离心管,UV树脂胶进行密封、紫外线照射凝固,测试防水性。2.Mirco-CT扫描和图像分析于离心管内滴加0.5ml碘海醇,立刻放入Mirco-CT内进行高精度扫描。第一次扫描完成后,放入4℃冰箱内。以第一次扫描时间点为0h,然后在6h、24h、48h、72h再次进行扫描。扫描获得各时间点图像数据用3D slicer以及AMIRA软件进行3D重建,测算样本的CT值。3.扩散系数计算与数学建模根据菲克定律建立数学模型,解方程组求得解析解,不断将每个时间点距离——CT值带入方程,与实验数据相拟合,求出关节软骨及钙化层的扩散系数k。第三部分:在小鼠钙化层发育过程中软骨细胞T-VDCC表达特异性1.1-8月龄小鼠膝关节组织样本切片1-8月龄小鼠膝关节取材、常规石蜡包埋切片。2.小鼠膝关节标本免疫组化染色观察对不同发育阶段的小鼠膝关节样本切片行各亚型T-VDCC和软骨细胞肥大化、骨化相关标志蛋白免疫组化染色,拍照观察,计算阳性细胞率和细胞数量。第四部分:抑制Cav3.3后软骨细胞肥大化/成骨分化的分子机制1.小鼠原代关节软骨细胞分离、提取、体外培养培养,ATDC5软骨细胞系培养选用出生7-10天的Balb/c小鼠,二氧化碳处死后分离、提取、体外培养关节软骨中的软骨细胞。P2代小鼠软骨细胞用于实验处理和相关检测。ATDC5细胞系采用同样培养条件,进行体外培养扩增。2.小鼠原代软骨细胞、ATDC5软骨细胞系T-VDCC表达鉴定两种细胞进行T-VDCC三种亚型（Cav3.1,Cav3.2,Cav3.3）免疫荧光染色和western blot检测,明确三种亚型在这两种细胞中的表达情况。3.不同浓度Mibefradil抑制T-VDCC后对ATDC5软骨的影响在正常贴壁培养的ATDC5软骨细胞培养基中加入浓度为1μm、5μm、10μm、15μm的Mibefradil,48h后采用流式细胞仪行凋亡检测,阿尔新蓝、茜素红、碱性磷酸酶细胞染色、免疫荧光染色和western blot检测,查看不同浓度的Mibefradil抑制T-VDCC后,ATDC5细胞的凋亡情况,Cav3.1,Cav3.2,Cav3.3表达情况,以及软骨表型和肥大化表型蛋白标志物表达情况。4.si RNA抑制ATDC5细胞Cav3.3表达后细胞受到的影响根据三种亚型在ATDC5细胞中的表达情况,采用Cav3.3-si RNA转染正常贴壁培养的ATDC5细胞,抑制Cav3.3的表达,48h后行RT-PCR检测,确认Cav3.3是否被敲低;转染72小时以后进行流式细胞仪凋亡检测,阿尔新蓝、茜素红、碱性磷酸酶细胞染色、免疫荧光染色和western blot检测,查看Cav3.3表达降低以后,ATDC5细胞凋亡情况以及软骨表型和肥大化表型,成骨标志蛋白标志物表达情况。实验结果:第一部分:原位观测活体小鼠关节成熟/不成熟钙化层的通透性1.6月龄小鼠膝关节钙化软骨层发育成熟1-5月龄小鼠膝关节发育欠成熟,潮线不明显,各结构（软骨层、钙化软骨层和软骨下骨）层次边界不清。6月龄小鼠膝关节基本发育成熟,各个组织层次分界明显,潮线、粘合线清晰可见。7月、8月龄小鼠发育进一步成熟,软骨下骨结构更加致密。2.成熟的钙化层对罗丹明B有阻滞作用,未成熟钙化层则没有罗丹明B（476 Da）在成熟钙化层组的软骨层扩散达到饱和浓度的时间是30 min;在未成熟钙化层组的软骨层扩散达到饱和浓度的时间是1h。在体扩散2h后,发育成熟钙化层组,潮线以下没有罗丹明B的荧光,而未成熟钙化层组则能检测到。3.成熟钙化层对TRITC-葡聚糖具有阻滞作用,未成熟钙化层则没有对于成熟钙化层组和未成熟钙化层组,TRITC-葡聚糖（20k Da）在软骨层达到饱和浓度的时间分别未30 min和1h。扩散2h后,未成熟钙化层组软骨下骨有低浓度TRITC-葡聚糖分布,提示TRITC-葡聚糖通过未成熟钙化层组织向软骨下骨渗透,而成熟钙化层组则难以检测到TRITC-葡聚糖。第二部分:基于Mirco-CT和菲克定律观测人体骨关节炎钙化层的通透性1.4级OA钙化层与正常钙化层相比结构改变,通透性增加Micro-CT扫描提示,4级OA钙化层于0-1级相比,孔隙率增加,厚度也增加。在72h渗透以后,4级OA软骨下骨出现CT值增强,提示造影剂到达软骨下骨,但是正常组织软骨下骨增强不明显。2.OA进程中钙化层扩散系数改变通过数据和数学模型推算,0-1级OA钙化层扩散系数为0.03±0.01μm2/s,而4级OA钙化层扩散系数为0.12±0.04μm2/s。意味着发生4级OA时,软骨和骨之间的物质交换更容易。第三部分:在小鼠钙化层发育过程中软骨细胞T-VDCC表达特异性1.T-VDCC在小鼠钙化层成熟过程中的表达逐步下降随着小鼠膝关节发育,深层软骨组织（钙化层形成区域）逐渐钙化,软骨细胞Cav3.1、Cav3.2、Cav3.3的表达都逐渐下降,与之伴随的是COL 10和成骨标志蛋白osteocalcin在该区域的持续高表达。而表中层软骨细胞中Cav3.1、Cav3.2、Cav3.3持续表达,不随月龄增加而改变;COL 10、osteocalcin、MMP 13只有1月2月龄有阳性表达,之后随着月龄增长,不再表达。第四部分:抑制Cav3.3后软骨细胞肥大化/成骨分化的分子机制1.原代小鼠关节软骨细胞和ATDC5细胞中主要表达Cav3.3亚型原代原代软骨细胞和ATDC5细胞Cav3.1、Cav3.2、Cav3.3免疫荧光染色显示,两种细胞Cav3.3都出现很强的荧光,而Cav3.1、Cav3.2荧光则几乎不可见。三种离子通道western blot提示,Cav3.3条带清晰可见,而Cav3.1、Cav3.2几乎没有条带。2.Mibefradil抑制ATDC5细胞中Cav3.3的表达培养基中加入1μm、5μm、10μm、15μm的Mibefradil以后,PCR结果提示随着浓度增加,Cav3.1、Cav3.2、Cav3.3表达都下降,Cav3.3趋势最明显。western blot提示同样的结果,但是Cav3.1、Cav3.2同样的没有条带,Cav3.3表达其中在10μm浓度时最为显着,同免疫荧光结果一致。3.Mibefradil促进ATDC5细胞凋亡,软骨表型丢失并出现肥大化、成骨倾向培养基中加入1μm、5μm、10μm、15μm梯度浓度的Mibefradil以后,随着抑制剂浓度增加,流式细胞仪检测提示ATDC5细胞早期凋亡比例增加,阿尔新蓝染色变浅,而茜素红和ALP成骨标志染色则上升。western blot提示随着抑制剂浓度升高,COL 2、SOX 9、ACAN表达下降,COL 10、MMP 13、RUNX 2表达升高,其中5μm、10μm最为显着。培养基中加入10μm Mibefradil以后,免疫荧光染色提示COL 2、SOX 9表达下降,而COL 10、MMP 13、RUNX2表达上升。提示VDCC被抑制以后,ATDC5软骨表型丢失,出现成骨倾向。4.si RNA转染ATDC5细胞以后Cav3.3表达下调,软骨细胞表型改变,出现肥大化以及成骨分化倾向。构建Cav3.3-si RNA进行成功转染后,PRC,western bolt,免疫荧光染色提示ATDC5细胞中的Cav3.3表达出现下调。转染后,流失细胞仪检测示早期凋亡比例增加,阿尔新蓝、茜素红、碱性磷酸酶染色提示软骨表型丢失,表现成骨分化倾向。免疫荧光染色和western blot提示,COL 2、SOX 9表达下降,COL 10、MMP 13、RUNX2表达升高。5.抑制Cav3.3后软骨细胞表现成骨分化倾向依赖osteocalcin/NFAT途径ATDC5细胞Cav3.3表达下调后,免疫荧光和western blot提示其COL 1、非磷酸化NFATc2表达显着升高,osteocalcin,磷酸化NFATc2表达稍微升高,提示这种成骨倾向是Calcineurin/NFAT依赖途径。结论:1.小鼠出生后6月龄关节钙化层发育成熟,成熟的钙化层具有屏障功能。2.重度OA钙化软骨层重塑过程中,孔隙率增加和扩散系数增高,易化了关节软骨和软骨下骨之间的物质交换。3.小鼠钙化层在逐渐钙化成熟过程中,该区域软骨细胞T型电压依赖型钙离子通道表达逐渐下降,而肥大化、骨化表型蛋白表达上升。4.Cav3.3能促进软骨表型维持,抑制其功能和表达以后,ATDC5细胞出现Calcineurin/NFAT信号通路依赖的肥大化和成骨分化倾向。
二、培养软骨同生长板的比较研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、培养软骨同生长板的比较研究（论文提纲范文）
（3）7-羟基黄烷酮抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡及对胫骨生长的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验试剂与仪器 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 大鼠生长板软骨细胞分离培养及鉴定 |
| 1.2.2 MTT法初步观察7-羟基黄烷酮对生长板软骨细胞培养的影响 |
| 1.2.3 流式细胞仪验证7-羟基黄烷酮对IL-1β引起细胞凋亡的抑制作用 |
| 1.2.4 7-羟基黄烷酮对大鼠骨骺闭合及胫骨生长的影响 |
| 1.2.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 软骨细胞免疫荧光鉴定结果 |
| 2.2 7-羟基黄烷酮抑制生长板软骨细胞凋亡的初步药物浓度筛选 |
| 2.3 流式细胞仪验证7-羟基黄烷酮对IL-1β引起细胞凋亡的抑制作用 |
| 2.4 7-羟基黄烷酮对大鼠骨骺闭合及胫骨生长的影响 |
| 3 讨论 |
（5）白藜芦醇抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡及对胫骨生长的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 动物 |
| 1.1.2 药物与试剂 |
| 1.1.3 仪器 |
| 1.2 大鼠生长板软骨细胞分离培养和鉴定 |
| 1.3 体外实验 |
| 1.3.1 MTT法筛选白藜芦醇对IL-1β引起的生长板软骨细胞凋亡的最佳抑制浓度 |
| 1.3.2 流式细胞仪检测白藜芦醇对IL-1β诱导细胞凋亡的抑制作用 |
| 1.4 动物实验观察白藜芦醇延迟大鼠骨骺闭合及促进长骨增长的作用 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 软骨细胞形态观察 |
| 2.2 软骨细胞免疫荧光鉴定 |
| 2.3 白藜芦醇抑制IL-1β诱导的生长板软骨细胞凋亡的最适药物浓度 |
| 2.4 对IL-1β诱导细胞凋亡的抑制作用 |
| 2.5 对大鼠骨骺闭合及胫骨生长的影响 |
| 3 讨论 |
（6）不同方式运动对生长期大鼠FGF、IGF信号及软骨内成骨的影响（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 实验动物及分组 |
| 运动方案 |
| 生长期大鼠原代软骨细胞增殖能力实验 |
| 生长板软骨细胞中相关细胞因子mRNA和蛋白检测 |
| 统计学处理 |
| 结 果 |
| 不同方式运动生长期大鼠生长板宽度指标比较 |
| 不同方式运动软骨细胞培养增殖染色比较 |
| 不同方式运动对FGF、IGF信号通路相关mRNA表达的影响 |
| 不同方式运动对FGF、IGF信号通路相关蛋白表达的影响 |
| 讨 论 |
（8）来曲唑抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡的最适药物浓度筛选（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验试剂与仪嚣 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 大鼠生长板软骨细胞分离培养 |
| 1.2.2 软骨细胞免疫荧光鉴定 |
| 1.2.3 绘制软骨细胞生长曲线 |
| 1.2.4 流式细胞仪检测来曲唑抑制IL-1β引起的细胞凋亡 |
| 1.2.5 MTT法筛选来曲唑抑制细胞凋亡的最适浓度 |
| 1.2.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 软骨细胞形态 |
| 2.2 软骨细胞免疫荧光鉴定结果 |
| 2.3 软骨细胞生长曲线 |
| 2.4 流式细胞仪检测来曲唑抑制IL-1β引起的细胞凋亡 |
| 2.5 来曲唑抑制生长板软骨细胞凋亡的最适药物浓度筛选 |
| 3 讨论 |
（9）犬缺血性骨软骨病细胞凋亡与基质紊乱的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTACT |
| 缩略词表(ABBREVIATION) |
| 第一章 文献综述 |
| 1 软骨 |
| 1.1 软骨的分类与组成 |
| 1.2 软骨的结构 |
| 1.3 软骨管 |
| 1.4 骨的形成 |
| 2 骨软骨病 |
| 2.1 骨软骨病的概况 |
| 2.2 骨软骨病的表征 |
| 2.3 骨软骨病的病因学 |
| 3 蛋白质组学 |
| 3.1 软骨相关疾病研究的蛋白质组学概况 |
| 3.2 软骨相关疾病研究的蛋白质组学技术发展 |
| 3.3 软骨及相关样品的蛋白质组学分析 |
| 4 本研究的内容、目的与意义 |
| 4.1 研究内容 |
| 4.2 研究目的与意义 |
| 第二章 缺血诱导犬骨软骨病 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器与设备 |
| 2.2 主要药品试剂 |
| 2.3 主要溶液及试剂的配制 |
| 2.4 试验动物及分组 |
| 2.5 血管阻断诱导犬骨软骨病损伤手术 |
| 2.6 术后护理 |
| 2.7 X线影像学检查 |
| 2.8 样本采集与处理 |
| 2.9 骨软骨病损伤组织学评估 |
| 2.10 TUNEL检测细胞凋亡 |
| 2.11 拉曼光谱学分析 |
| 2.12 数据分析与处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 X线影像学观察 |
| 3.2 组织学评估 |
| 3.3 TUNEL检测细胞凋亡 |
| 3.4 扫描电镜观察 |
| 3.5 拉曼光谱学分析 |
| 4 讨论 |
| 第三章 基于Label free蛋白组学技术的犬骨软骨病差异表达蛋白分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器与设备 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要溶液及试剂的配制 |
| 2.4 试验动物样品采集与编号 |
| 2.5 Label-free蛋白质组学分析 |
| 2.6 差异蛋白验证 |
| 2.7 数据分析与处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 蛋白质浓度定量与SDS-PAGE电泳 |
| 3.2 酶解肽段浓度测定 |
| 3.3 蛋白质和肽段鉴定结果 |
| 3.4 鉴定蛋白与肽段的数据质控相关的统计图 |
| 3.5 蛋白生物信息功能注释分析 |
| 3.6 GO分析 |
| 3.7 KEGG分析 |
| 3.8 蛋白质互作网络分析 |
| 3.9 蛋白质组学验证 |
| 4 讨论 |
| 第四章 HtrA1 在犬缺血性骨软骨病中的作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器与设备 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 骺生长软骨细胞与软骨外植体的分离与培养 |
| 2.4 骺生长软骨细胞的形态观察 |
| 2.5 骺生长软骨细胞鉴定 |
| 2.6 细胞生长曲线的绘制 |
| 2.7 HtrA1 过表达载体构建与转染 |
| 2.8 Annexin V-FITC/PI双染色法检测凋亡细胞 |
| 2.9 荧光定量PCR |
| 2.10 Western-blot |
| 2.11 统计分析 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 骺生长软骨细胞的分离、培养与细胞形态的观察 |
| 3.2 骺生长软骨细胞鉴定结果 |
| 3.3 软骨细胞生长曲线的绘制 |
| 3.4 软骨细胞转染条件摸索 |
| 3.5 软骨细胞HtrA1 过表达验证 |
| 3.6 HtrA1 过表达诱导软骨细胞凋亡 |
| 3.7 HtrA1 过表达通过作用XIAP/caspase9/caspase3 通路诱导软骨细胞凋亡 |
| 3.8 HtrA1 过表达诱导软骨细胞基质变化 |
| 3.9 HtrA1 重组蛋白处理对软骨外植体的作用 |
| 3.10 拉曼光谱学分析 |
| 3.11 重组蛋白HtrA1 诱导软骨外植体凋亡与基质相关蛋白的变化 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 研究创新点 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（10）关节钙化软骨层通透性观测以及T型钙离子通道介导其发育的机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩写览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 原位观测活体小鼠关节成熟/不成熟钙化层的通透性 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 基于Mirco-CT和菲克定律观测人膝骨关节炎软骨钙化层的通透性 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第四章 在小鼠钙化层发育过程中软骨细胞T-VDCC表达特异性 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 第五章 抑制Cav3.3 后软骨细胞肥大化/成骨分化的分子机制 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述1 关节钙化软骨层研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述2 电压依赖性钙离子通道在骨软骨细胞中的作用 |
| 参考文献 |
| 博士研究生期间发表的论文以及成果 |
| 致谢 |
四、培养软骨同生长板的比较研究（论文参考文献）
- [1]抑制生长板软骨细胞凋亡药物筛选及白藜芦醇延迟大鼠骨骺闭合的作用[J]. 谢艳,李无阴,邢伟鹏,裴圆圆,王娜. 中国组织工程研究, 2022(23)
- [2]儿童骺板损伤组织工程学治疗研究进展[J]. 王亦维,李瑞祺,郑朋飞. 中华实用儿科临床杂志, 2022(02)
- [3]7-羟基黄烷酮抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡及对胫骨生长的影响[J]. 卢承印,谢艳,李无阴,王庆丰,张云芳. 中国疗养医学, 2022(02)
- [4]慢性肾功能不全幼鼠胫骨生长板软骨细胞糖原合成酶激酶3β表达水平变化对生长板发育的影响[J]. 余建平,王小健,安雪军,贾中伟,郭松佳,路晓,郭秀生,苏云星. 中华小儿外科杂志, 2021(12)
- [5]白藜芦醇抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡及对胫骨生长的影响[J]. 郭畅,谢艳,李冬冬,殷娜,张丽. 上海中医药杂志, 2021(12)
- [6]不同方式运动对生长期大鼠FGF、IGF信号及软骨内成骨的影响[J]. 赵常红,李世昌,孙朋,徐帅,方幸. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志, 2021
- [7]慢性肾衰竭幼鼠胫骨生长板软骨细胞初级纤毛高表达加速软骨细胞分化的机制研究[J]. 王小健,李荣山,田伟,郑刚,毕宏,王艳红,董丽娜,郭松佳,路晓,周晓霜. 中华肾脏病杂志, 2021(09)
- [8]来曲唑抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡的最适药物浓度筛选[J]. 王朋涛,谢艳,杨艳梅,孔凡国,王娜,张海龙. 中国医药导刊, 2021(08)
- [9]犬缺血性骨软骨病细胞凋亡与基质紊乱的机制研究[D]. 李桥. 华中农业大学, 2021
- [10]关节钙化软骨层通透性观测以及T型钙离子通道介导其发育的机制研究[D]. 黄杨. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)