一、应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别方法优化的研究（论文文献综述）
陶维昆,黄飞,刘波,赵建清,方翟,高庆华[1]（2022）在《超微量DNA模板扩增鉴定绵羊早期胚胎性别体系优化》文中进行了进一步梳理本实验旨在运用超微量胚胎DNA模板扩增SRY基因鉴定绵羊早期胚胎性别PCR体系和方法优化。根据绵羊Y染色体性别决定SRY基因的723 bp的保守序列设计引物,析因法建立巢式PCR体系,联合扩增SRY和GAPDH基因,经绵羊静脉血液和胚胎超微量DNA样本调整测试灵敏度后,切割40枚绵羊桑椹胚的少量胚细胞进行性别鉴定,并对PCR产物进行测序对比。结果显示:通过2%的琼脂糖电泳检测,除363 bp的GAPDH基因扩增条带公母羊皆出现外,只有公羊出现209 bp的雄性特异扩增条带。本实验建立的绵羊早期胚胎性别鉴定方法体系灵敏度可以达到约10 pg（3～4个细胞）,对胚胎进行性别鉴定的准确率为100%。
吴文静[2]（2021）在《主要核酸等温扩增新技术研究》文中研究说明环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）是根据靶基因6个不同区域进行4种特异引物设计,并通过恒温环境以链置换DNA聚合酶为反应条件,实现核酸体外扩增反应的技术。非洲猪瘟（African Swine Fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus,ASFV）引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,致死率高达100%。本研究基于LAMP技术建立了ASFV现场可视化快速检测的方法。欧洲毒株基因（即格鲁吉亚2007/1株）与报道的中国辽宁省沈阳市沈北新区某养殖场发生的非洲猪瘟病毒序列完全匹配,我们以此为靶序列构建非洲猪瘟病毒质粒,设计LAMP引物F3、B3、LF、LB、FIP、BIP。通过进行引物优化、温度优化、时间优化以及体系优化实验,建立了基于环介导等温扩增技术检测非洲猪瘟病毒的方法,具有较好的特异性。采用5种不同的模板浓度对该方法的灵敏度进行试验。结果显示:灵敏度实验中最低检测限为2拷贝,检测时间仅需20分钟,检测结果可根据颜色判断,进行现场可视化检测。此外,基于LAMP技术,还建立了一种快速检测牛性别的方法。分别设计LAMP的雌雄共有引物和雄性特异引物,进行后续LAMP方法的研究。采用公牛和雌牛的血液DNA作为模板,通过优化反应时间、温度、引物比例和体系,建立了环介导等温扩增技术检测牛早期胚胎性别的方法。采用9种不同浓度的模板对方法的灵敏度进行检测,结果显示:雌雄共有引物可检测的最低浓度为2pg/μL,雄性特异引物可检测的最低浓度为5pg/μL。特异性实验显示牛的样品与羊和猪的样品无交叉反应,雌雄共有引物和雄性特异引物检测准确率为100%。表明该检测方法灵敏度高以及特异性强。重组酶聚合酶扩增技术（Recombinase Polymerase Amplification,RPA）是利用重组酶和单链结合蛋白在常温下协同实现引物与模板的特异结合,以代替传统PCR热循环中的变性和复性过程的新型恒温体外核酸扩增技术。本研究建立了基于重组酶聚合酶扩增技术检测牛性别的方法。根据牛的保守区基因序列,分别设计了RPA的雌雄共有引物和雄性特异引物,利用性别不同的牛、羊和猪的样品对该方法的特异性进行验证;并采用7种不同浓度的模板对该方法的灵敏度进行检测。特异性结果显示:雌雄共有引物能检测到雌牛和公牛样品,而雄性特异引物只能检测到公牛样品,说明牛的样品与羊和猪的样品无交叉反应。在灵敏度实验中,雌雄共有引物可检测的最低浓度为1pg/μL,雄性特异引物可检测的最低浓度为2pg/μL,则RPA的灵敏度高于LAMP。基于RPA技术的牛性别检测方法特异性强,灵敏度高,检测时间只需5分钟,不需要特殊的仪器设备,操作便捷。综上所述,本研究共建立了三种检测方法,分别是基于LAMP技术的非洲猪瘟病毒检测和牛性别鉴定方法以及基于RPA技术的牛性别鉴定方法。三种方法均有较强的特异性和较高的灵敏度,反应时间短,适用于实验室或者现场快速检测。
马梦婷,高庆华,王姗姗,陈晓利,郑永富[3]（2016）在《牙釉质基因巢式扩增鉴定牛早期胚胎性别的研究》文中提出根据牙釉质基因在牛X染色体和Y染色体上存在的差异设计巢式引物,对牛静脉血基因组DNA样本以及10枚牛早期胚胎DNA样本进行巢式扩增和电泳分析,以鉴定性别。结果表明:利用此方法能够对牛10 pg量血液基因组DNA进行扩增鉴定性别,雌性产生1条片段长度为311 bp的源于X染色体的条带,雄性产生1条源于X染色体的条带（311 bp）和1条片段长度为251 bp的源于Y染色体的条带,对10枚胚胎进行鉴定,6枚为雄性,4枚为雌性。说明牙釉质基因巢式PCR扩增鉴定牛早期胚胎性别方法可靠,准确性和敏感性较高。
孟醒,张正茂,赵强[4]（2015）在《家畜早期胚胎性别鉴定技术的研究进展》文中研究表明家畜性别控制是人为控制家畜后代性别的一项新的动物繁殖技术。性别控制的一个主要途径就是对早期胚胎的性别进行鉴定。目前,这种方法已经在畜牧生产中有了比较广泛的应用,其采用的方法也在发展过程中不断地完善和成熟,特别是PCR方法。本文主要综述家畜早期胚胎性别鉴定的各种技术方法及其研究慨况,并阐述该技术在生产实践中的应用前景。
何允[5]（2012）在《小鼠早期胚胎及胎儿成纤维细胞性别鉴定方法研究》文中指出哺乳动物的早期性别鉴定是人为进行性别控制的手段之一。在畜牧业生产中,通过性别控制能够建立优化商品畜群,充分发挥母畜的繁殖能力及公畜的生长优势,提高畜产品经济效益,并能够在生产前排除潜在有害基因型,防止性连锁疾病；在分子生物学、胚胎细胞学及发育遗传学等基础学科的研究中,胚胎性别鉴定是探索胚胎发育机制、深化干细胞研究、实现肿瘤分子调控等热点研究课题的环节之一；胚胎成纤维细胞具有细胞体积大数目多、来源广泛且取材方便以及在体外培养条件下能够迅速生长繁殖,并且能够长期传代等优点,广泛应用于胚胎干细胞的分离与培养、体细胞克隆与核移植等课题的研究,因此小鼠早期胚胎及成纤维细胞的性别鉴定在畜牧生产、遗传育种、胚胎发育学及临床应用范围内均具有实用价值。本课题使用双重PCR法对小鼠附植前8-细胞胚胎以及小鼠胎儿成纤维细胞进行了性别鉴定,旨在探寻一种简便可靠的双重PCR性别鉴定方法,为小鼠ES细胞培养、体细胞克隆及胚胎移植等研究提供参考。具体内容包括：（1）引物设计及其合理性检测：以雄性特异性SRY基因序列设计了一对特异性引物,即上游引物SRY250U:5’-CTTTTTCCAGGAGGCACAGA-3’及下游引物SRY250L:5’-GACAGGCTGCCAATAAAAGC-3’;以雄性及雌性共有的锌指结构ZFX基因序列设计另一对内标引物,ZFX399U 5’-AAGAGAGTCCATTCAAGTGTGA-3’为上游引物,ZXF399L: 5’-GCTACCTTTGTTGCCGAAAT-3’为下游引物；使用离心柱式动物基因组DNA提取试剂盒提取小鼠肝脏组织DNA基因组作为模板,在适宜的反应体系及条件下,分别用两对引物进行体外扩增,扩增产物以2%琼脂糖凝胶电泳进行结果检测。结果表明SRY基因引物对能够对雄性基因组扩增出约250bp的目标条带,雌性基因组扩增结果为空白,而ZFX基因引物对可对雄性及雌性小鼠肝脏组织基因组均扩增出399bp大小的目标条带；使用已知性别小鼠肝脏基因组为模板,同时用两对引物进行扩增,结果雄性小鼠扩增结果为内标条带及判断条带同时存在,而雌性小鼠扩增结果为399bp一个条带,说明试验所设计引物具备有效性及合理性；（2）将适龄健康的雌鼠注射PMSG和hCG后与雄鼠合笼,将见栓后2d的雌鼠进行无菌手术,取出子宫并以M2操作液冲洗,得到2.5d胚龄的胚胎。将所得胚胎经0.5%链霉蛋白酶于37℃处理30s去除透明带,M2操作液洗涤后,从每个8-细胞胚胎吸取4个卵裂球用于性别鉴定；将卵裂球加入8μL ddH（2）O后以5μL石蜡油覆盖,恒温煮沸5mmin后-20℃冰浴5min,14000rpm离心2mmin,取上清液用于扩增,扩增体系为：ddH（2）O7μl；10×Buffer 3μl；Mg（2=）=2μl；10×Taq Buffer 2.5μl；dNTP 3μl；引物P11μl；引物P（2） 1μl；DNA样本5μl；Taq酶1.5μl；反应条件为：预变性94℃,5min；变性94℃,30s；退火60℃,35s；延伸72℃,40s,共30个循环；72℃,10min,4℃保存。扩增结束后取5μl产物在1.5%琼脂糖电泳上电泳检查结果。本试验共对40枚小鼠附植前胚胎进行性别鉴定,结果显示其中20枚胚胎电泳检测扩增结果出现250bp大小的判断条带及399bp大小的内标条带,由此判断此20枚附植前胚胎为雄性胚胎；12枚8-细胞胚胎卵裂球提取DNA后进行体外扩增后,电泳结果显示399bp大小的内标条带,判断条带为阴性,因此判断为雌性胚胎；另有8枚胚胎因条带缺失或模糊不明无法进行性别判断。性别鉴定成功率为80.00%。（3）将适龄健康的雌鼠注射激素后与雄鼠合笼,13d后将雌鼠处死进行无菌手术,摘取完整子宫并以取出13.5d胎龄的胎鼠用于分离MEFs；将所得MEFs的细胞密度调整至1×106个/ml,于37℃、5%C02、饱和湿度培养箱中培养,每24h换液一次,待80-90%细胞贴壁时进行传代培养,并观察贴壁情况,得出F3代MEF贴壁及发育状况均优于其他代细胞；取第3代MEFs按离心柱型细胞基因组DNA提取试剂盒提取总DNA；使用自主设计的SRY基因引物及ZFX基因引物对MEFs DNA进行体外扩增,扩增体系为：ddH（2）O 7μl；10×Buffer 3μl；Mg（2=）2μl；10×Taq Buffer 2.5μl；dNTP 3μl；引物P1 1μl；引物P（2）1μl；DNA样本5μl；Taq酶1.5μl；反应条件为：预变性94℃,5min；变性94℃,30s；退火60℃,35s；延伸72℃,40s,共30个循环；72℃,10min,4℃保存。扩增结束后取5μl产物在1.5%琼脂糖电泳上电泳检查结果。本试验共对30只小鼠13.5d胎儿所制备的第3代MEFs进行了性别鉴定,结果表明其中13个MEFs为雄性,电泳结果同时显示大小为250bp的判断条带及399bp大小的内标条带,7个MEFs为雌性,其DNA样本体外扩增电泳结果仅显示ZFX基因内标条带,另有10个细胞系由于条带缺失无法进行性别判断,其检出率为66.67%。本试验自主设计了雄性小鼠特异性SRY基因引物对及雌雄小鼠共有的ZXF基因引物对,并以已知性别小鼠肝脏基因组作为模板进行体外扩增,对引物合理性及有效性进行了检测,成功地建立了双重PCR性别鉴定体系；根据此体系对小鼠附植前胚胎及MEFs进行了双重PCR性别鉴定,其检出率分别达到80.00%及66.67%。通过对试验结果的分析讨论得出,从8-细胞胚胎中吸取4个卵裂球为体外扩增的适宜模板量,从13.5d胎龄制备的MEFs经过3次传代后贴壁发育情况较优,适宜用于提取基因组进行性别鉴定,此结论对小鼠ES细胞培养、体细胞克隆及胚胎移植的研究提供了参考,具有一定实际意义。
赵雪[6]（2012）在《奶牛性别控制技术研究》文中认为胚胎性别鉴定技术和性别控制技术为哺乳动物胚胎工程核心技术之一，该技术的优化和成熟，对胚胎工程技术在生产实践上的广泛应用具有重要的经济意义。本研究通过对奶牛胚胎体外生产过程中多个环节进行优化进行性别控制。包括（1）利用不同免疫方式免疫动物，制备高效价H-Y抗体，筛选雌性胚胎；（2）优化胚胎体外生产（IVP）技术关键条件，包括卵母细胞体外成熟条件、性控精液的分离方法、性控精液的密度、胚胎的体外培养液挑选等环节；（3）研究了卵巢输送时保存温度对卵母细胞的回收、成熟、性控精液体外受精、胚胎发育及两种应激基因Hsp70.1和Bax在囊胚中的表达的影响；（4）研究胚胎性别控制技术联合胚胎冷冻技术对牛胚胎体外发育、胚胎质量及其牛犊出生率的影响等研究。得到如下结果与结论：（1）利用免疫动物制备H-Y抗原抗体，与早期胚胎共培养筛选雌性胚胎，结果表明4-8Cell胚胎采用H-Y抗原抑制的方法不能进行准确的性别鉴定，桑葚胚采用H-Y抗原抑制的方法雌性胚胎的PCR验证结果为81.5%，说明选择性阻滞胚胎发育为一种比较可靠雌性胚胎选择的方法。（2）EGF和IGF-Ⅰ联合应用能够促进牛卵母细胞的体外成熟，提高IVF胚胎的体外发育能力；Percoll梯度离心法与上浮法的精子IVF胚胎的发育能力差异不显着（P>0.05）；0.5×106个/ml的精子密度比较适合，可提高性控精液的利用率；mSOF和G1/G2更适合与性控精液IVF胚胎的培养，其中G1/G2是商品化培养液，效果稳定；利用最优化的条件，比较性控精液与普通精液IVF胚胎发育率，发现X精子、Y精子和未分离精子的卵裂率和囊胚率无显着差异， X精子IVF胚胎雌性率为89.9%（62/69），未分离精子雌雄比例为47.9：52.1。（3）卵巢运输温度对性控精液的体外受精率及受精后胚胎的发育有显着的影响。卵巢在35°C保存3-4h显着降低了A、B级卵母细胞的回收率，卵母细胞的成熟率、性控精液的受精率及囊胚的发育率，同时第七天囊胚内的细胞凋亡率及Hsp70.1和Bax的表达显着升高。来源于25°C保存卵巢的卵母细胞受精率显着高于其它两组。（4）性控精液获得的IVF胚胎冷冻后，其复活率和24h孵化率，同对照组相比差异不显着,但非性控精液的IVF冷冻胚胎解冻后，48h的孵化率高于性控组。两组囊胚的细胞凋亡率没有显着性差异。两组囊胚内细胞团细胞与滋养层细胞数之间的比例分别为0.26±0.13和0.24±0.09，二者差异不显着。性控胚胎和非性控胚胎移植后的妊娠率、出生率以及性控效率差异不显着。
闫雷,张晓杰,许厚强,林家栋[7]（2009）在《家畜性别控制的研究进展》文中研究指明对家畜性别决定机理、受精前的性别控制技术、受精后的胚胎性别鉴定技术以及今后性别控制技术的前景和趋势等方面进行了分析讨论,旨在为科研工作者和畜牧生产者提供参考。
张伟[8]（2007）在《PCR法鉴定牛早期胚胎性别的研究》文中提出PCR技术为胚胎的性别鉴定提供了新的手段。利用PCR进行胚胎的性别鉴定具有快速、灵敏、准确和易操作等诸多优点,是各种胚胎性别鉴定技术中最有前景的一项技术。本实验以提高鉴定的灵敏度、减少鉴定时间及建立胚胎性别鉴定的可操作程序为指导进行实验的设计,分别做了以下探讨,并取得了预期的结果:1.利用牛性别决定基因（SRY）作为雄性特异性基因和酪蛋白αs1基因（CSN1S1）作为内标基因分别设计雄性特异性引物和内标引物,两对引物均各设计一对嵌套式引物进行多重PCR,并同时对外引物组合和内引物组合进行体系的优化,以便用于牛早期胚胎性别鉴定。SRY基因和CSN1S1基因外、内引物扩增片断长度分别为357bp、232bp、528bp和367bp。实验结果表明,这两个引物组合建立的扩增体系均有较高的扩增稳定性和准确率,但它们的灵敏度均不高（约50pg,相当于16个细胞的DNA量）,这在一定程度上限制了其在胚胎性别鉴定中的应用。2.由于SRY基因和CSN1S1基因建立的多重巢式PCR体系的灵敏度无法满足胚胎性别鉴定的要求,故在以上优化体系为基础的基础上,建立巢式PCR体系,以提高扩增的灵敏度。经反复实验,该体系的灵敏度可达到一个细胞的DNA量,完全可以用于牛早期胚胎的性别鉴定。3.由于SRY基因为单拷贝基因,当胚胎性别鉴定时,所采得细胞数很少时,体系中SRY基因的相对量就较少,这大大的限制了其灵敏度。故在选择Y染色体上的一段重复序列作为雄性特异性引物,以肿瘤坏死因子（TNFα）为内标引物建立多重PCR,进行牛早期胚胎性别鉴定。共设计四对引物—Y染色体重复序列外引物和内引物其大小分别为534bp和480bp,肿瘤坏死因子外引物和内引物大小分别为357bp和272bp。试验结果表明,优化后的多重PCR体系的灵敏度可达到三个细胞,可以满足胚胎性别鉴定的需要。4.虽然Y染色体重复序列和肿瘤坏死因子（TNFα）基因建立的多重PCR体系的灵敏度较高,但在细胞数较少时,电泳条带很弱,且较不稳定。故建立多重巢式PCR。如上所述,其灵敏度也可达到一个细胞,且稳定性很好。
宋淑珍[9]（2007）在《绵羊性别鉴定PCR方法的研究》文中研究说明本文通过对绵羊性别决定基因检测多重和巢式PCR体系的建立及优化、性染色体引物的特异性检测，建立了绵羊性别决定基因检测的PCR方法，并讨论了影响PCR扩增的几个因素以及它们之间的相互关系。主要内容包括：（1）从GenBank中检索到长度为723bp的绵羊SRY基因序列作为Y染色体特异序列，长度为3249bp的β-B-珠蛋白基因作为常染色体内标基因序列，利用Primer 3软件，设计了长度均为20bp性染色体巢式引物SRY337、SRY193和常染色体的巢式引物G559、G278。（2）对所设计的引物进行筛选组合，建立了绵羊早期胚胎性别鉴定的多重和多重巢式PCR反应体系。（3）对多重PCR体系用4×3×4因子组合析因设计实验（dNTP的终浓度分别为100μM、200μM、300μM、400μM；Mg2+浓度分别为1.5mM、2mM、2.5mM、3mM：温度分别为58℃、60℃、62℃）确定了dNTP浓度、Mg2+浓度和温度的最优组合，优化了扩增程序。对巢式PCR体系第二轮扩增进行了不同dNTP浓度、Mg2+浓度和温度、以及不同扩增程序的筛选和优化。（4）用本试验中所采用的SRY巢式引物分别对人、牛、兔基因组DNA及淋巴细胞缓冲液进行扩增，检测引物的特异性和分析性别鉴定过程中可能存在的污染因素。绵羊肝组织基因组扩增结果表明：公羊可同时扩增出性染色体和常染色体片段，而母羊只能扩增出常染色体片段，引物特异性高，外引物间、内引物间扩增温度相差不大，可进行多重扩增。通过析因试验筛选的最优多重PCR性别鉴定体系为：SRY337、G559的浓度分别为0.4州，Mg2+为2.0 mM，dNTP为300μM，Taq酶1U，10×PCR Buffer为2.5μl，扩增体系25μl；扩增程序：94℃预变性3min—{94℃变性20s—58℃退火30s—72℃延伸20s}30个循环—72℃延伸3min—4℃保存。优化后的多重PCR体系扩增公羊肝组织基因组，灵敏度为100pg。在巢式PCR中，以建立的最优多重PCR体系进行第一轮扩增20个循环后，析出5μl进行第二轮扩增，其最优反应体系为：SRY193、G278浓度均为0.4μM，Mg2+为2.0 mM，dNTP为200μM，Taq酶1U，10×PCR Buffer为2.5μl，扩增体系25μl；扩增程序：94℃预变性3min—{94℃变性20s—64℃退火延伸20s—}30个循环—72℃延伸3min—4℃保存。本多重巢式PCR性别鉴定体系的灵敏度为100fg（1个细胞约5pg），4细胞的DNA就可扩增鉴定结果，总鉴定时间约为110min。特异性检测结果表明：SRY基因引物只对羊、牛雄性特异，其他动物雄性DNA及淋巴细胞缓冲液均不影响检测结果。本实验所建立的巢式PCR体系相对简单、快速、准确率高，完全可以在生产实践中用来鉴定绵羊性别。
付强,张明,卢克焕[10]（2006）在《家畜胚胎性别鉴定技术的研究进展》文中进行了进一步梳理性别控制是按照人们的意愿生产特定性别后代的动物繁殖新技术。早期胚胎性别鉴定是人们实现性别控制的重要途径。随着科学技术的发展和各种新的研究工具在性别鉴定中的应用,尤其是聚合酶链式反应（PCR）技术的应用,性别鉴定在生产实践中的应用越来越广泛。本文综述了胚胎性别鉴定方法的基本原理和研究概况,并阐述了该技术存在的问题和发展前景。
二、应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别方法优化的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别方法优化的研究（论文提纲范文）
（1）超微量DNA模板扩增鉴定绵羊早期胚胎性别体系优化（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试剂和仪器 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 引物设计和合成 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 绵羊血液DNA与胚胎基因组样品制备 |
| 1.4.2 血液PCR反应体系、条件 |
| 1.4.3 单个胚胎超微量DNA梯度PCR反应体系条件绵羊单个胚胎基因组DNA样品为模板，验证内、外引物的特异性，优化扩增条件，反应体系如下。 |
| 1.4.4 桑椹胚超微量DNA巢式PCR反应体系条件 |
| 1.4.5 琼脂糖凝胶电泳分析 |
| 1.4.6 胚胎DNA PCR产物测序 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 血液基因组扩增结果 |
| 2.2 绵羊桑椹胚超微量DNA梯度扩增结果 |
| 2.3 绵羊桑椹胚超微量DNA扩增结果 |
| 2.4 雄性胚胎PCR产物测序比对结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（2）主要核酸等温扩增新技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1 章 绪论 |
| 1.1 非洲猪瘟病毒 |
| 1.1.1 非洲猪瘟病毒的病原学特征 |
| 1.1.2 非洲猪瘟病毒的传播途径 |
| 1.1.3 非洲猪瘟病毒的致病机理 |
| 1.1.4 非洲猪瘟病毒的检测方法 |
| 1.2 牛早期性别鉴定 |
| 1.2.1 性别控制的主要途径 |
| 1.2.2 性别决定的机理 |
| 1.2.3 牛早期性别鉴定方法及研究进展 |
| 1.3 环介导等温扩增技术概述 |
| 1.4 重组酶聚合酶扩增技术(RPA)概述 |
| 1.4.1 扩增原理 |
| 1.4.2 引物设计 |
| 1.4.3 扩增产物的检测方式 |
| 1.4.4 RPA技术特点 |
| 1.4.5 重组酶聚合酶扩增技术(RPA)应用 |
| 1.5 研究目的及意义 |
| 第2 章 非洲猪瘟病毒LAMP检测方法的建立 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 样品来源 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 仪器与设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 样本的制备 |
| 2.2.2 常规PCR反应体系和琼脂糖凝胶电泳检测 |
| 2.2.3 可视化试验 |
| 2.2.4 反应条件优化 |
| 2.2.5 非洲猪瘟病毒灵敏度试验 |
| 2.2.6 非洲猪瘟病毒特异性试验 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 PCR扩增产物的检测 |
| 2.3.2 反应条件优化 |
| 2.3.3 非洲猪瘟病毒灵敏度试验 |
| 2.3.4 非洲猪瘟病毒特异性试验 |
| 2.4 小结 |
| 第3 章 牛早期胚胎性别鉴定LAMP方法的建立 |
| 3.1 材料、试剂与仪器 |
| 3.1.1 材料和试剂 |
| 3.1.2 仪器与设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 模板的制备 |
| 3.2.2 常规PCR反应体系和琼脂糖凝胶电泳检测 |
| 3.2.3 可视化试验 |
| 3.2.4 灵敏度试验 |
| 3.2.5 特异性试验 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 雄性特异引物对和雌雄共用引物对PCR扩增产物的检测 |
| 3.3.2 反应条件和体系的优化 |
| 3.3.3 灵敏度试验 |
| 3.3.4 特异性试验 |
| 3.4 小结 |
| 第4 章 牛早期胚胎性别鉴定RPA方法的建立 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 样品来源 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 模板的制备 |
| 4.2.2 RPA引物设计 |
| 4.2.3 RPA反应体系 |
| 4.2.4 RPA反应产物纯化 |
| 4.2.5 RPA扩增产物的鉴定 |
| 4.2.6 灵敏度实验 |
| 4.2.7 特异性实验 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 RPA扩增产物的检测 |
| 4.3.2 RPA反应温度优化 |
| 4.3.3 灵敏度实验 |
| 4.3.4 特异性实验 |
| 4.4 小结 |
| 第5 章 讨论 |
| 第6 章 总结和创新 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（3）牙釉质基因巢式扩增鉴定牛早期胚胎性别的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 DNA样品制备 |
| 1.3 引物设计 |
| 1.4 PCR扩增 |
| 1.5 琼脂糖凝胶电泳检测 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
（4）家畜早期胚胎性别鉴定技术的研究进展（论文提纲范文）
| 1 家畜性别控制 |
| 2 早期胚胎性别鉴定的方法及研究进展 |
| 2.1 细胞遗传学方法 |
| 2.2 免疫学方法 |
| 2.2.1 细胞毒性分析法 |
| 2.2.2 间接荧光免疫法 |
| 2.2.3 囊胚形成抑制法 |
| 2锌 |
| 2.1锌对反刍动物营养生理功能的影响 |
| 2.2锌对反刍动物免疫功能的影响 |
| 2.3 锌对反刍动物生产性能、繁殖性能的影响 |
| 2.4锌对反刍动物瘤胃环境的影响 |
| 2.3生物化学方法 |
| 2.4 分子生物学方法 |
| 2.4.1 雄性特异DNA探针法 |
| 2.4.2 荧光原位杂交 (FISH) 法 |
| 2.4.3 聚合酶链反应 (PCR) 法 |
| 2.4.3. 1 PCR扩增雄性特异性DNA片段检测法 |
| 2.4.3. 2 ZFX/ZFY基因检测法 |
| 2.4.3. 3 SRY基因检测法 |
| 2.4.3. 4 AMEL基因检测法 |
| 2.4.4 RAPD技术法 |
| 2.4.5 LAMP法 |
| 3 展望 |
（5）小鼠早期胚胎及胎儿成纤维细胞性别鉴定方法研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 文献综述 |
| 1. 哺乳动物性别鉴定研究简史 |
| 2. 哺乳动物性别决定机理 |
| 3. 早期胚胎性别鉴定主要方法 |
| 3.1 细胞遗传学法 |
| 3.2 免疫学方法 |
| 3.2.1 间接免疫荧光分析法 |
| 3.2.2 细胞毒性法 |
| 3.2.3 囊胚形成抑制法 |
| 3.3 生物化学方法 |
| 3.4 分子生物学方法 |
| 3.4.1 聚合酶链式反应法 |
| 3.4.2 LAMP法 |
| 3.4.3 DNA探针法 |
| 4. 小鼠附植前胚胎及成纤维细胞的双重PCR性别鉴定法 |
| 4.1 小鼠附植前胚胎取样技术 |
| 4.1.1 毛细管吹吸法 |
| 4.1.2 显微手术法 |
| 4.1.3 徒手分割法 |
| 4.1.4 免疫手术法 |
| 4.1.5 酸性溶液溶解透明带法 |
| 4.2 成纤维细胞的形态特点 |
| 4.3 小鼠成纤维细胞的研究及其应用MEF在胚胎移植的应用进展 |
| 4.4 PCR性别鉴定法的类型 |
| 5. PCR法胚胎性别鉴定技术的应用前景 |
| 第二部分 试验部分 |
| 试验一 引物设计及其合理性检测 |
| 前言 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器与设备 |
| 1.3 主要药品、试剂和溶液的配置 |
| 1.3.1 主要药品与试剂 |
| 1.3.2 主要溶液配制 |
| 2. 试验方法 |
| 2.1 引物设计与合成 |
| 2.2 小鼠基因组DNA的制备 |
| 2.3 引物合理性检测 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 小鼠SRY基因引物设计合理性检测 |
| 3.2 小鼠ZFX基因引物设计合理性检测 |
| 3.3 双重PCR鉴定小鼠肝脏细胞性别的研究 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 引物设计合理性对双重PCR性别鉴定效果的影响 |
| 4.2 以小鼠肝脏组织基因组为模板的双重PCR性别鉴定 |
| 5. 小结 |
| 试验二 小鼠8-细胞胚胎卵裂球的双重PCR性别鉴定方法的研究 |
| 前言 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器与设备 |
| 1.3 主要药品、试剂和溶液配置 |
| 1.3.1 主要药品与试剂 |
| 1.3.2 主要溶液配制 |
| 2. 试验方法 |
| 2.1 小鼠8-细胞胚胎的获取 |
| 2.2 小鼠8-细胞胚胎卵裂球的获取 |
| 2.3 小鼠早期胚胎DNA的提取 |
| 2.4 小鼠8-细胞胚胎卵裂球的双重PCR性别鉴定 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 小鼠8-细胞胚胎卵裂球的体外培养 |
| 3.2 小鼠8-细胞胚胎卵裂球的性别鉴定 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 PCR反应体系及反应条件对性别鉴定效果的影响 |
| 4.2 胚胎因素对双重PCR性别鉴定效果的影响 |
| 4.3 其他 |
| 5. 小结 |
| 试验三 MEFs的分离培养及SRY基因性别鉴定 |
| 前言 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器与设备 |
| 1.3 主要药品、试剂和溶液配置 |
| 1.3.1 主要药品与试剂 |
| 1.3.2 主要溶液配制 |
| 2. 试验方法 |
| 2.1 13.5d小鼠胎儿的获取 |
| 2.2 MEFs的分离培养 |
| 2.3 MEFs的传代培养 |
| 2.4 MEFs DNA的提取 |
| 2.5 MEFs的性别鉴定 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 MEFs的分离、培养与传代 |
| 3.2 MEFs的性别鉴定 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略词表 |
| 致谢 |
| 发表论文一览表 |
（6）奶牛性别控制技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 哺乳动物性别决定的分子机理及相关基因进展 |
| 1.1 性别决定分子机理 |
| 1.1.1 性别决定发育机理 |
| 1.1.2 性别决定遗传学机理 |
| 1.2 性别决定的相关基因 |
| 1.2.1 与XY性别发育相关的基因 |
| 1.2.2 与XX性别发育相关的基因 |
| 1.3 小结与展望 |
| 第二章 性别控制与鉴定主要途经研究概述 |
| 2.1 分离X和Y精子的方法 |
| 2.1.1 电泳法 |
| 2.1.2 免疫学分离法 |
| 2.1.3 流式细胞分离法 |
| 2.2 早期胚胎性别鉴定的研究进展 |
| 2.2.1 细胞遗传学方法 |
| 2.2.2 免疫学方法 |
| 2.2.3 X染色体相关酶法 |
| 2.2.4 分子生物学方法 |
| 2.3 其他方法 |
| 2.4 应用与展望 |
| 第三章 利用H-Y抗体实现奶牛早期胚胎性别控制的研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 试验试剂 |
| 3.1.3 仪器与设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 抗原的制备 |
| 3.2.2 受体免疫 |
| 3.2.3 H-Y抗体的检测 |
| 3.2.4 牛跖胎的获得 |
| 3.2.5 与H-Y抗体的共培养以鉴定胚胎性别 |
| 3.2.6 PCR法鉴定奶牛早期胚胎性别 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 直接凝集反应 |
| 3.3.2 不同免疫方法产生抗体的情况 |
| 3.3.3 与H-Y抗体共培养鉴定胚胎性别 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 性控精液体外生产奶牛胚胎的研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂和仪器 |
| 4.1.2 牛卵母细胞的采集与体外成熟 |
| 4.1.3 精子获能与体外受精 |
| 4.1.4 胚胎培养 |
| 4.1.5 PCR技术鉴定IVF胚胎性别 |
| 4.1.6 实验设计 |
| 4.1.7 数据处理 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 成熟液中添加EGF和IGF-Ⅰ对卵母细胞成熟和IVF胚胎发育的影响 |
| 4.2.2 性控精子处理方法对IVF胚胎发育的影响 |
| 4.2.3 性控精子密度对IVF胚胎发育的影响 |
| 4.2.4 不同培养液对性控胚胎体外发育的影响 |
| 4.2.5 性控精液与普通精液IVF胚胎发育率和性别鉴定 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 卵巢运输温度对性控精液体外受精及受精后胚胎发育的影响 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 主要仪器设备 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 卵母细胞的采集和分级 |
| 5.1.4 卵母细胞的体外成熟培养 |
| 5.1.5 卵母细胞核相染色及判断 |
| 5.1.6 精子获能与体外受精 |
| 5.1.7 受精胚胎的判断及培养 |
| 5.1.8 囊胚的凋亡染色 |
| 5.1.9 实时定量PCR |
| 5.1.10 数据统计与分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 卵巢运输温度对卵母细胞回收及成熟的影响 |
| 5.2.2 卵巢运输温度对性控精液体外受精及胚胎发育的影响 |
| 5.2.3 卵巢运输温度对性控精液体外受精囊胚内细胞凋亡的影响 |
| 5.2.4 卵巢运输温度对性控精液体外受精囊胚中Hsp70.1和Bax表达的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 牛性别控制联合胚胎冷冻技术对胚胎质量、胚胎发育及性控牛出生率的影响 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 主要试剂、仪器及材料 |
| 6.1.2 体外受精及其胚胎培养 |
| 6.1.3 牛胚胎的冷冻与复苏 |
| 6.1.4 囊胚的凋亡染色 |
| 6.1.5 囊胚细胞总数染色及差异染色 |
| 6.1.6 克隆囊胚的胚胎移植 |
| 6.1.7 实验设计 |
| 6.1.8 数据处理 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 性别控制联合胚胎冷冻技术对胚胎体外发育的影响 |
| 6.2.2 性别控制联合胚胎冷冻技术对胚胎质量的影响--细胞凋亡检查 |
| 6.2.3 性别控制联合胚胎冷冻技术对胚胎质量的影响—囊胚细胞总数及ICM和TE细胞的比值(差异染色检查) |
| 6.2.4 性别控制联合胚胎冷冻技术对胚胎体内发育及出生率的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）家畜性别控制的研究进展（论文提纲范文）
| 1 性别决定的生物学机制 |
| 1.1 性别决定的发育学机制[5] |
| 1.2 性别决定的遗传学机制[6] |
| 2 性别控制的方法 |
| 2.1 受精前精子性别控制 |
| 2.1.1 H-Y抗原免疫法: |
| 2.1.2 流式细胞仪分离法[10]: |
| 2.2 受精后精子性别控制 |
| 2.2.1 细胞遗传学方法: |
| 2.2.3 免疫学方法: |
| 2.2.4 分子生物学方法: |
| 2.2.4. 1 雄性特异性DNA探针检测法: |
| 2.2.4. 2 荧光原位杂交法: |
| 2.2.4. 3 聚合酶链式反应法: |
| 2.2.4. 4 环—酶恒温扩增法: |
| 3 应用与展望 |
（8）PCR法鉴定牛早期胚胎性别的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 第一章 文献综述 |
| 前言 |
| 一、性别决定机制 |
| 1. 性别决定的过程 |
| 2. 性别决定的遗传学机制 |
| 2.1 SRY 基因与性别决定 |
| 2.2 SOX 基因家族与性别决定 |
| 二、性别控制技术 |
| 1. 人工授精过程中的性别控制——X、Y 精子的分离 |
| 1.1 梯度法 |
| 1.2 流式细胞分选法 |
| 1.3 免疫法 |
| 2. 调节受精环境法 |
| 3. 胚胎移植阶段的性别控制——早期胚胎的性别鉴定 |
| 3.1 细胞学方法 |
| 3.2 X-联结酶测定法 |
| 3.3 免疫学方法 |
| 3.4 雄性特异性DNA 探针法 |
| 3.5 PCR 扩增法 |
| 3.6 RAPD 技术 |
| 3.7 LAMP 法 |
| 三、PCR 法鉴定牛早期胚胎性别存在的问题 |
| 四、本实验的目的 |
| 第二章 实验部分 |
| 实验一 利用性别决定基因（SRY）和酪蛋白α_(s1)基因（CSN1S1）进行牛早期胚胎性别鉴定的研究 |
| 一、多重PCR 鉴定牛早期胚胎性别的优化研究 |
| （一） 引言 |
| （二） 材料与方法 |
| 1. 试验材料 |
| 1.1 组织样品 |
| 1.2 胚胎 |
| 1.3 药品 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 主要溶液 |
| 2 主要试验方法 |
| 2.1 引物设计 |
| 2.2 牛总基因组DNA 的提取 |
| 2.3 提取牛总基因组DNA 的浓度和纯度的检测 |
| 2.4 PCR 体系的建立 |
| 2.5 PCR 体系的优化 |
| 2.6 优化后的PCR 体系的应用 |
| （三） 结果与分析 |
| 1. 牛基因组DNA 的提取与鉴定 |
| 2. PCR 优化结果与分析 |
| 2.1 最佳退火温度 |
| 2.2 不同引物浓度对双重PCR 的影响 |
| 2.3 最佳Mg~(2+)浓度的筛选 |
| 2.4 最佳Taq 酶浓度的筛选 |
| 2.5 不同循环数对多重PCR 的影响 |
| 3. 优化后体系的应用 |
| 3.1 优化体系灵敏度检测结果 |
| 3.2 优化后体系扩增的准确率与稳定性 |
| 3.3 淋巴细胞扩增结果 |
| 3.4 胚胎细胞扩增效果 |
| 二、多重巢式PCR 鉴定牛早期胚胎性别的优化研究 |
| （一） 前言 |
| （二） 材料与方法 |
| 1. 试验材料（同上） |
| 2. 试验方法 |
| 2.1 牛基因组DNA 的提取及检测（同上） |
| 2.2 多重巢式PCR 体系的建立 |
| 2.3 PCR 反应程序 |
| 3. 多重巢式PCR 体系的应用 |
| 3.1 牛基因组DNA 的扩增 |
| 3.2 淋巴细胞扩增 |
| 3.3 胚胎细胞扩增 |
| （三） 结果与分析 |
| 1. 多重巢式PCR 扩增牛基因组DNA 的结果 |
| 2. 多重巢式PCR 扩增牛早期胚胎DNA 的结果 |
| 实验二 利用Y 染色体重复序列和肿瘤坏死因子（TNFα）进行牛早期胚胎性别鉴定的研究 |
| 一、Y 染色体重复序列和肿瘤坏死因子(TNFα)多重PCR |
| （一） 前言 |
| （二） 材料与方法 |
| 1. 试验材料（同试验一） |
| 2. 主要试验方法（同试验一） |
| 2.1 引物设计 |
| 2.2 牛基因组DNA 的提取及纯度检测（同实验一） |
| 2.3 PCR 体系的建立 |
| 2.4 PCR 体系的优化 |
| 2.5 优化后体系的应用 |
| （三） 结果与分析 |
| 1. 最佳退火温度筛选结果 |
| 2. 最佳引物浓度搭配筛选结果 |
| 3. Mg~(2+)浓度的影响 |
| 4. 最佳Taq 酶的量 |
| 5. 循环数对PCR 的影响 |
| 6. 优化体系灵敏度检测结果 |
| 7. 优化后体系扩增的准确率与稳定性 |
| 8. 胚胎细胞扩增结果 |
| 二、多重巢式PCR 鉴定牛早期胚胎性别的优化研究 |
| （一） 前言 |
| （二） 材料与方法 |
| 1. 试验材料 |
| 2. 主要试验方法 |
| 2.1 多重巢式PCR 基准体系的建立 |
| 2.2 不同的扩增方法对巢式PCR 扩增反应的影响的研究 |
| 2.3 胚胎细胞扩增（同以上实验） |
| （三） 结果与分析 |
| 1. 不同扩增方法的扩增结果 |
| 2. 胚胎细胞扩增结果 |
| 第三章 讨论与结论 |
| 一、讨论 |
| 1. 胚胎性别鉴定雄性特异性基因的选择及引物设计 |
| 2. PCR 扩增方式的选择 |
| 3. PCR 体系的优化 |
| 二、结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（9）绵羊性别鉴定PCR方法的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| SUMMARY |
| 第一章 文献综述 |
| 1 哺乳动物性别决定的机理 |
| 1.1 性别决定相关基因及其研究进展 |
| 1.1.1 SRY基因 |
| 1.1.2 与性别决定相关的其他基因 |
| 1.2 性别决定的分子模型 |
| 1.2.1 Z-基因模型 |
| 1.2.2 DSS-基因模型 |
| 1.2.3 Jimenez模型 |
| 1.2.4 Jennifer的模型 |
| 2 动物性别控制技术与其研究进展 |
| 2.1 受精前性别控制技术 |
| 2.2 受精后性别控制技术 |
| 2.2.1 细胞遗传学方法-核型分析法 |
| 2.2.2 免疫学方法 |
| 2.2.3 X染色体相关酶法(X-Linked Enzymes) |
| 2.2.4 分子生物学方法 |
| 3 PCR法进行牛羊性别控制现状及其发展前景 |
| 第二章 绵羊性别鉴定多重PCR体系的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 组织样品 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.2.1 主要仪器 |
| 1.2.2 主要药品 |
| 1.2.3 溶液配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 羊总基因组DNA的制备 |
| 2.2 基因组DNA的检测 |
| 2.3 模板DNA的稀释 |
| 2.4 细胞计数 |
| 2.4.1 白细胞的制备 |
| 2.4.2 白细胞的计数 |
| 2.4.3 白细胞的稀释 |
| 2.4.4 白细胞DNA的提取 |
| 2.5 引物设计 |
| 2.5.1 引物的合成与稀释 |
| 2.6 PCR反应体系和反应程序 |
| 2.7 引物的筛选与组合 |
| 2.8 PCR扩增产物检测 |
| 2.9 PCR体系的优化 |
| 2.9.1 引物浓度的选择 |
| 2.9.2 用析因设计进行PCR体系的优化 |
| 2.9.3 酶浓度的影响 |
| 2.9.4 灵敏度的检测 |
| 2.9.5 不同反应体系的影响 |
| 2.9.6 循环次数的影响 |
| 2.9.7 扩增程序的选择 |
| 3 最优PCR体系的应用 |
| 3.1 公母羊基因组的扩增 |
| 3.2 淋巴细胞的扩增 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 羊肝组织基因组DNA的检测 |
| 4.2 引物的筛选 |
| 4.3 多重PCR体系优化的结果 |
| 4.4 优化后的多重PCR体系 |
| 5 讨论 |
| 5.1 多重PCR的灵敏度 |
| 5.2 多重PCR引物浓度 |
| 5.3 MG~(2+)、dNTP及退火温度 |
| 6 结论 |
| 第三章 绵羊性别鉴定巢式PCR的建立及优化 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 基因组DNA的提取与检测 |
| 2.2 细胞计数及其DNA的提取 |
| 2.3 引物设计与稀释 |
| 3 羊早期胚胎性别鉴定巢式PCR体系的建立 |
| 3.1 绵羊早期胚胎性别鉴定巢式PCR体系的优化 |
| 3.1.1 巢式PCR体系扩增温度的确定 |
| 3.1.2 Mg~(2+)浓度对扩增结果的影响 |
| 3.1.3 dNTP浓度的选择 |
| 3.1.4 灵敏度的检测 |
| 3.1.5 扩增程序的选择 |
| 3.2 优化后巢式PCR体系的应用 |
| 3.2.1 巢式PCR扩增公母羊基因组 |
| 3.2.2 巢式PCR扩增淋巴细胞 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 温度选择 |
| 4.2 镁离子对扩增结果的影响 |
| 4.3 不同DNTP浓度对扩增结果的影响 |
| 4.4 巢式PCR扩增的灵敏度 |
| 4.5 两步与三步控温法扩增结果 |
| 4.6 扩增公母羊基因组 |
| 4.7 单细胞扩增 |
| 5 讨论 |
| 5.1 MG~(2+)对扩增结果的影响 |
| 5.2 两步控温巢式PCR扩增法对扩增结果的影响 |
| 5.3 巢式PCR灵敏度 |
| 6 结论 |
| 第四章 特异性检验 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 溶液的配制 |
| 1.2.2 人头发DNA的提取 |
| 1.2.3 家兔、牛、羊的基因组提取 |
| 1.2.4 对家兔、男人、牛、羊基因组等进行巢式PCR扩增 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 PCR扩增结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（10）家畜胚胎性别鉴定技术的研究进展（论文提纲范文）
| 1 早期生物学方法 |
| 1.1 细胞遗传学法 |
| 1.2 X-连接酶测定法 |
| 1.3 免疫学方法 |
| 1.3.1 细胞毒性分析法 |
| 1.3.2 间接荧光免疫法 |
| 1.3.3 囊胚形成抑制法 |
| 2 分子生物学方法 |
| 2.1 核酸探针法 |
| 2.2 荧光原位杂交法(FISH) |
| 2.3 PCR鉴定法 |
| 2.4 LAMP法 |
| 3 胚胎性别鉴定存在的问题和前景 |
四、应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别方法优化的研究（论文参考文献）
- [1]超微量DNA模板扩增鉴定绵羊早期胚胎性别体系优化[J]. 陶维昆,黄飞,刘波,赵建清,方翟,高庆华. 中国畜牧杂志, 2022(02)
- [2]主要核酸等温扩增新技术研究[D]. 吴文静. 上海师范大学, 2021(07)
- [3]牙釉质基因巢式扩增鉴定牛早期胚胎性别的研究[J]. 马梦婷,高庆华,王姗姗,陈晓利,郑永富. 中国草食动物科学, 2016(03)
- [4]家畜早期胚胎性别鉴定技术的研究进展[J]. 孟醒,张正茂,赵强. 青海畜牧兽医杂志, 2015(05)
- [5]小鼠早期胚胎及胎儿成纤维细胞性别鉴定方法研究[D]. 何允. 西南大学, 2012(10)
- [6]奶牛性别控制技术研究[D]. 赵雪. 西北农林科技大学, 2012(03)
- [7]家畜性别控制的研究进展[J]. 闫雷,张晓杰,许厚强,林家栋. 畜牧与饲料科学, 2009(04)
- [8]PCR法鉴定牛早期胚胎性别的研究[D]. 张伟. 甘肃农业大学, 2007(01)
- [9]绵羊性别鉴定PCR方法的研究[D]. 宋淑珍. 甘肃农业大学, 2007(02)
- [10]家畜胚胎性别鉴定技术的研究进展[J]. 付强,张明,卢克焕. 广西农业生物科学, 2006(S1)