一、眼球结膜下注射体会（论文文献综述）
刘雅宁[1]（2021）在《AQP5通过激活Akt信号通路促进角膜上皮损伤修复和神经再生》文中指出目的水通道蛋白（aquaporins,AQPs）作为一种跨膜蛋白,在维持细胞水稳态方面起着重要作用。近年来已被证实在多种组织中参与细胞间粘附、细胞迁移、细胞增殖等多种细胞功能,本研究旨在探讨水通道蛋白5（aquaporin 5,AQP5）在角膜上皮损伤修复中的作用。方法采用CRISPR/Cas9技术构建以C57BL/6N小鼠为背景的AQP5基因敲除(AQP5-/-)小鼠。选取相同周龄的C57BL/6N小鼠作为AQP5+/+小鼠与AQP5-/-小鼠进行实验。通过对小鼠进行角膜上皮刮除术,建立AQP5+/+和AQP5-/-小鼠角膜上皮损伤模型。使用荧光素钠、β-tubulin III和Ki-67分别作为角膜上皮缺损、角膜神经和角膜上皮增殖的标志物对小鼠角膜进行染色。用蛋白质印迹法和免疫荧光染色对角膜上皮神经再生相关信号磷酸化蛋白激酶B（phospho-Akt,p-Akt）和神经生长因子（nerve growth factor,NGF）进行检测。通过外源性给予NGF和Akt抑制剂（Akt inhibitor,Akti）对AQP5-/-小鼠进行干预诱导,观察小鼠角膜上皮损伤修复速度和神经再生情况。结果（1）AQP5在AQP5+/+小鼠角膜上皮细胞的细胞膜中广泛表达,而在AQP5-/-小鼠角膜上皮细胞中几乎不表达。并且与AQP5+/+小鼠相比,AQP5-/-小鼠角膜上皮损伤修复速度和神经再生速度明显延迟。（2）对小鼠角膜进行神经染色和敏感度测量发现,与AQP5+/+小鼠相比,AQP5-/-小鼠神经纤维密度和角膜敏感度均明显下降。（3）与AQP5+/+小鼠相比,无论是否对小鼠进行角膜上皮刮除术,AQP5-/-小鼠角膜上皮中Ki-67阳性细胞数量、NGF和p-Akt表达水平均明显减少,提示了AQP5基因敲除后,小鼠角膜上皮细胞增殖能力和神经再生能力可能存在缺陷,并且可能通过影响Akt信号通路激活进而抑制角膜上皮损伤修复速度和神经再生。（4）对AQP5-/-小鼠外源性给予NGF进行干预治疗,发现NGF治疗组的小鼠角膜上皮损伤修复和神经再生速度显着快于PBS处理组,并且伴有p-Akt表达水平的增加。（5）对AQP5-/-小鼠外源性给予NGF进行干预治疗,AQP5-/-小鼠角膜神经纤维密度和角膜敏感度明显增加。（6）Akti阻断了NGF对AQP5-/-小鼠的角膜上皮损伤修复和神经再生速度的促进作用。结论本研究发现AQP5-/-小鼠角膜上皮损伤修复速度的抑制是由于角膜上皮细胞增殖和神经再生的明显缺陷所致。这一结果为水通道蛋白参与细胞增殖和神经再生的过程提供了证据,并提示AQP5是加速角膜缺损修复的一种可能的治疗靶点。
罗瑞[2]（2021）在《药物联合手术治疗猫难治性角膜溃疡的疗效分析》文中提出角膜溃疡是一个广义上的概念,角膜上皮发生任何的缺失都可称为角膜溃疡,为临床上常见的眼科疾病之一,大多数是由于角膜损伤而继发感染。临床症状表现为患眼流泪,结膜充血,眼睑痉挛并伴有脓性分泌物等。简单的角膜溃疡通常采用局部药物治疗即可痊愈,但当溃疡经久不愈,易转成难治性的角膜溃疡。当发展为深层角膜溃疡时,容易导致角膜穿孔,当角膜发生穿孔或濒临穿孔、视力严重受损和药物治疗无法控制病情发展时,需要采取手术治疗。随着生活水平提高,养宠人士越来越多,为了有效的诊断和治疗角膜溃疡,本文就选取收集2020年6月1日起至2021年3月1日期间,在广东省深圳地区瑞鹏宠物医院第二中心医院就诊的角膜溃疡病例患病猫共计120例,患眼数共计139例。通过对患猫感染角膜溃疡的不同程度、不同类型、不同感染原因进行药物治疗及经药物治疗无效后联合手术治疗,分别进行疗效分析,为猫角膜溃疡的诊断提供理论依据。（1）通过临床诊断结合眼科检查以及实验室检查综合评定角膜溃疡等级,将其分为轻度、中度及重度,并进行病因的诊断。真菌性角膜溃疡一般使用抗真菌药物治疗,比如两性霉素B、那他霉素、氟康唑,也可服用伊曲康唑胶囊等,以及免疫抑制剂类的环孢素滴眼液;当发生病毒所致的角膜溃疡时,选取病原敏感的抗病毒药物来治疗炎症,如:阿昔洛韦滴眼液、更昔洛韦眼用凝胶,当症状较严重时,或者病毒伴随全身反应,可以应用全身抗病毒治疗的方法,防止感染加重;细菌性角膜溃疡首选妥布霉素联合头孢菌素或氟喹诺酮类联合头孢菌素,使用盐酸多西环素、环丙沙星和氨基糖苷类药物（庆大霉素）或左氧氟沙星滴眼液（可乐必妥）、妥布霉素滴眼液（托百士）、氧氟沙星（泰利必妥）局部点眼结合硫酸新霉素消炎眼膏治疗效果较好。（2）先进行药物治疗,若药物治疗无效则为难治性角膜溃疡并联合手术进行治疗,一般采用手术方式为:角膜溃疡清创术、角膜板层切除术、带蒂结膜瓣遮盖术、结膜瓣遮盖术、眼睑内翻矫正术及角膜热成型术等治疗,药物联合手术治疗不同程度角膜溃疡:治疗轻度角膜溃疡患眼5例,有效数为5例,有效率为100.00%;治疗中度角膜溃疡患眼9例,有效数为8例,有效率为88.89%;治疗重度角膜溃疡患眼32例,有效数为29例,有效率为90.62%。可得药物联合手术治疗难治性角膜溃疡,有效率非常高。药物联合手术治疗不同类型角膜溃疡:治疗浅层角膜溃疡患眼4例,有效数为4例,有效率为100.00%;治疗复杂性角膜溃疡患眼24例,有效数为23例,有效率为95.83%;治疗深层角膜溃疡患眼14例,有效数为12例,有效率为85.71%;治疗边缘性角膜溃疡患眼4例,有效数为3例,有效率为75.00%。总计药物治疗有效率为66.91%,药物治疗无效后联合手术治疗有效率为91.30%。药物联合手术治疗不同角膜溃疡感染原因的结果及分析:其中微生物感染导致的角膜溃疡联合手术进行治疗患眼11例,有效数为9例,有效率为81.82%;机械损伤导致的角膜溃疡联合手术进行治疗患眼28例,有效数为26例,有效率为92.86%;化学物质灼烧导致的角膜溃疡联合手术进行治疗患眼3例,有效数为3例,有效率为100.00%;而由于干眼症（2例）和角膜异物（6例）等原因导致的角膜溃疡联合手术治疗患眼4例,有效数为4例,有效率为100.00%。（3）药物治疗对于浅层的角膜溃疡效果甚好,但角膜溃疡发展为难治性角膜溃疡时,手术联合药物治疗有效率显着高于单纯进行药物治疗。
韩芳[3]（2021）在《TSLP及cGAS-STING调控角膜抗真菌感染免疫反应的作用及机制研究》文中指出真菌性角膜炎（FK）是由致病性真菌引起的最具破坏性的角膜感染性疾病之一,其发病率高且遍布全球。长期佩戴隐形眼镜和外伤分别是发达国家和发展中国家真菌性角膜炎最重要的发病诱因。真菌性角膜炎通常在感染诸如烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus）和镰刀菌（Fusarium）等病原性真菌的人群中发展。其中,中国最常见的病原性真菌是与植物相关的烟曲霉菌。由于滥用抗生素、过量使用皮质类固醇、视力预后不良以及缺乏有效的对症治疗方法,真菌性角膜炎已经成为许多发展中国家致盲的主要病因。因此,阐明真菌性角膜炎的发病机理并且开发新的治疗方法具有重要意义。天然免疫和适应性免疫均参与角膜抗真菌感染的过程。天然免疫是机体控制感染的第一道宿主防线。在角膜发生感染以后,角膜上的模式识别受体（PRRs）与真菌病原体相关的分子模式（PAMP）相互作用,进而启动天然免疫应答以保护角膜免受真菌病原体的侵害。此反应过程产生大量的趋化因子和细胞因子来募集炎性细胞并消除病原体,这对于维持正常的角膜结构至关重要。被激活的天然免疫随后启动有效的获得性免疫反应。树突状细胞（DCs）是专业的抗原呈递细胞（antigen presenting cells,APC）,在启动抗真菌天然免疫反应过程中起重要作用。DCs通过识别环境中的抗原性物质,表达识别烟曲霉菌的多种PRRs,进而通过抗原呈递和分泌细胞因子诱导T细胞免疫反应。CD4+T细胞在适应性免疫中具有至关重要的作用。当受到抗原刺激后,幼稚CD4+T细胞被激活、增殖并分化为具有不同效应表型的细胞,包括Th1（helper T cell 1）、Th2、Th17 和调节性 T（T regulatory,Treg）细胞等。许多研究表明,DCs分泌的细胞因子,比如IL-1β、IL-6和IL-23,能够促进细菌和真菌感染过程中Th17炎症反应的发展。然而,在真菌性角膜炎中,烟曲霉菌是否诱导Th17型炎症反应尚不明确。DCs如何感知烟曲霉菌并进一步诱导CD4+T细胞分化也需要进一步的探究。胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）是一种IL-7相关的细胞因子,主要在上皮细胞受到细菌、真菌、寄生虫和炎性细胞因子刺激时表达。最近的研究证实其他多种类型的细胞,例如肥大细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、DCs、滋养层细胞、癌症或癌症相关细胞也能够在特定炎症条件下产生TSLP。已有研究表明DCs分泌的TSLP能够诱导Th2型炎症反应并且参与多种过敏性疾病（哮喘、过敏性皮炎、炎症性肠病）的发病过程。我们课题组先前的研究证实,烟曲霉菌刺激人角膜上皮细胞（HCECs）分泌的TSLP可以促进DCs增殖,诱导DCs成熟并分泌TNF-α、IL-4和IL-13等细胞因子,最终诱导Th2型炎症反应。但是,在烟曲霉菌刺激下DCs是否分泌TSLP,以及TSLP在烟曲霉菌诱导的Th17炎症反应中的作用尚不清楚。环状GMP-AMP（cGAMP）合酶（cGAS）是一种胞质DNA传感器,通过产生第二信使cGAMP活化干扰素基因刺激蛋白（stimulator of interferon gene,STING）介导的信号级联反应,进一步促进Ⅰ型干扰素（IFNs）的产生并激活天然免疫反应。cGAS-STING信号通路不仅可以介导针对病原体感染的保护性免疫反应,还可以识别肿瘤来源的DNA并产生内在抗肿瘤免疫。但是,自身和病原体DNA对cGAS-STING信号通路的异常激活也会导致自身免疫和炎症性疾病。因此,保持对cGAS-STING信号通路的适当激活至关重要。HCECs分布在人角膜组织的最外层,是角膜抵抗病原体感染的第一道屏障。角膜受到病原体感染以后,激活HCECs中的PRRs并启动天然免疫反应。然而,烟曲霉菌是否可以激活HCECs中cGAS-STING信号通路以及该通路在真菌性角膜炎中的作用尚不明确。在本论文中,我们致力于揭示烟曲霉菌感染的DCs分泌的TSLP在Th17炎症反应中的作用,进一步阐明体外和体内促成Th17细胞对真菌性角膜炎免疫应答的分子机制。此外,我们还将探究cGAS-STING信号通路在真菌性角膜炎中作用及机制。本论文研究内容主要分为以下三个部分:第一部分烟曲霉菌刺激DCs分泌TSLP诱导Th17型炎症反应研究1.研究目的本部分旨在研究烟曲霉菌刺激的DCs是否诱导CD4+T细胞向Th17细胞分化,明确DCs在诱导Th17型获得性免疫中的作用。研究烟曲霉菌是否促进DCs分泌TSLP,明确TSLP在烟曲霉菌刺激的DCs诱导的Th17炎症反应中的作用。2.研究方法2.1 从C57BL/6小鼠的股骨和胫骨中分离出骨髓来源的树突状细胞（BMDCs）。使用小鼠CD4+T细胞分选试剂盒纯化小鼠脾脏来源的CD4+T细胞。使用流式细胞术鉴定分离得到的DCs和CD4+T细胞的纯度以及活化水平。2.2 将烟曲霉菌刺激的DCs与CD4+T细胞共培养3到4天,使用CFSE检测CD4+T细胞增殖水平。使用qRT-PCR和流式细胞术检测CD4+T细胞中Th17细胞因子IL-17A、IL-17F和IL-22表达水平。2.3 烟曲霉菌刺激DCs 1、3、6、12、24和48小时后,使用qRT-PCR、ELISA、Western blot和免疫荧光检测DCs中TSLP表达水平。2.4 使用“角膜划线法”构建小鼠真菌性角膜炎模型。使用裂隙灯观察拍照、荧光素染色和H&E染色评估小鼠角膜炎进展。对小鼠角膜炎进行临床评分。使用qRT-PCR和免疫荧光检测TSLP和CD11c在小鼠角膜组织中表达情况。2.5 使用rmTSLP处理幼稚CD4+T细胞3到4天,使用CFSE检测CD4+T细胞增殖水平。使用qRT-PCR、ELISA和流式细胞术检测Th17细胞因子的表达水平。2.6 使用 TSLP siRNA 敲低 DCs 中 TSLP,使用 TSLPR siRNA 敲低 CD4+T 细胞中TSLPR,使用Western blot检测TSLP和TSLPR敲低效率。使用CFSE检测CD4+T细胞增殖水平。使用qRT-PCR和流式细胞术检测Th17细胞因子的表达水平。2.7 小鼠结膜下注射TSLP siRNA或rmTSLP预处理,然后使用烟曲霉菌感染小鼠角膜1天。使用裂隙灯拍照观察和荧光素染色评估小鼠角膜炎进展。对小鼠角膜炎进行临床评分。使用qRT-PCR和ELISA检测TSLP、IL-17A、IL-17F和IL-22在小鼠角膜组织中表达情况。3.研究结果3.1 分离纯化得到纯度合格的DCs和CD4+T细胞。CD3+CD4+的CD4+T细胞比例超过95%。流式细胞术表明烟曲霉菌刺激可以提高DCs中细胞表面CD80、CD86 和 MHC-Ⅱ 表达水平。3.2 CFSE分析表明烟曲霉菌刺激的DCs促进幼稚CD4+T细胞增殖。烟曲霉菌刺激的DCs提高CD4+T细胞中IL-17A、IL-17F和IL-22 mRNA水平。流式细胞术结果表明烟曲霉菌刺激的DCs与CD4+T细胞共培养,促进CD4+T细胞表达 IL-17A。3.3 qRT-PCR、ELISA、Western blot表明烟曲霉菌处理促进DCs表达TSLP。免疫荧光结果也表明烟曲霉菌提高DCs中TSLP表达水平。3.4 感染烟曲霉菌后第1天小鼠角膜炎症状最为严重。在小鼠真菌性角膜炎模型中,TSLP和DCs标记蛋白CD11c在小鼠角膜组织中的表达明显增加。3.5 外源性rmTSLP促进幼稚CD4+ T细胞增殖。qRT-PCR和ELISA结果表明rmTSLP可以提高CD4+T细胞中IL-17A、IL-17F和IL-22表达水平。3.6 在DCs中TSLP敲低效率高达80%以上。在DCs细胞中敲低TSLP以后,烟曲霉菌刺激的DCs不能促进CD4+T细胞增殖,也不能促进CD4+T细胞中IL-17A、IL-17F和IL-22表达。同样,在CD4+T细胞中敲低TSLPR以后,烟曲霉菌刺激的DCs也不能诱导CD4+T细胞向Th17细胞分化。3.7 外源性rmTSLP促进小鼠真菌性角膜炎进展和角膜组织中IL-17A、IL-17F和IL-22表达水平。敲低TSLP明显抑制烟曲霉菌诱导的小鼠真菌性角膜炎进展和小鼠角膜组织中Th17细胞因子表达。4.研究结论4.1烟曲霉菌刺激的DCs促进CD4+T细胞增殖并诱导CD4+T细胞向Th17细胞分化。4.2 烟曲霉菌促进DCs和小鼠真菌性角膜炎模型角膜组织中TSLP表达。4.3 烟曲霉菌刺激的DCs通过TSLP促进CD4+T细胞增殖并诱导Th17炎症反应。4.4 烟曲霉菌在小鼠角膜炎模型中通过TSLP促进Th17炎症反应。第二部分TSLP通过JAK/STAT信号通路诱导Th17炎症反应机制研究1.研究目的本部分旨在研究烟曲霉菌刺激的DCs诱导幼稚CD4+T细胞向Th17细胞分化所涉及的具体信号通路。在细胞水平和小鼠真菌性角膜炎模型中,研究该信号通路在Th17炎症反应和真菌性角膜炎发展过程中的具体作用机制。2.研究方法2.1将烟曲霉菌刺激的DCs与CD4+T细胞共培养4天,提取CD4+T细胞RNA进行高通量测序,鉴定参与CD4+T细胞向Th17细胞分化所涉及的具体信号通路。使用qRT-PCR验证测序得到的JAK/STAT信号通路关键分子的变化。2.2 CD4+T细胞与烟曲霉菌刺激的DCs共培养或使用外源性rmTSLP处理,使用Western blot检测Th17转录因子RORyt及JAK/STAT信号通路蛋白p-JAK1、p-JAK2和p-STAT3表达水平。敲低TSLP或TSLPR后,将烟曲霉菌刺激的DCs与CD4+T细胞共培养4天,使用Western blot检测JAK/STAT信号通路蛋白表达水平。2.3共培养体系中,使用JAK1/JAK2抑制剂ruxolitinib或STAT3抑制剂BBI608处理,然后使用流式细胞术检测CD4+T细胞中IL-17A的表达水平,使用qRT-PCR检测CD4+T细胞中IL-17A、IL-17F和IL-22的mRNA表达水平。在rmTSLP处理CD4+T细胞体系中加入ruxolitinib或BBI608,再次使用流式细胞术和qRT-PCR检测Th17细胞因子表达水平。2.4小鼠结膜下预注射ruxolitinib或BBI608,然后用烟曲霉菌感染小鼠角膜1天。使用裂隙灯观察拍照和荧光素染色评估小鼠角膜炎进展。对小鼠角膜炎进行临床评分。使用qRT-PCR和ELISA检测TSLP、IL-17A、IL-17F和IL-22在小鼠角膜组织中表达情况。3.研究结果3.1高通量测序结果表明JAK/STAT信号通路是烟曲霉菌诱导Th17炎症反应中发生变化最为明显的信号途径。进一步使用qRT-PCR对测序得到的JAK/STAT信号通路中主要分子进行验证。3.2使用烟曲霉菌刺激的DCs与CD4+T细胞共培养可以明显提高CD4+T细胞RORyt、p-JAK1、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平。外源性rmTSLP同样可以提高上述蛋白水平。而敲低TSLP或TSLPR以后,烟曲霉菌刺激的DCs与CD4+T细胞共培养或rmTSLP处理均不能提高CD4+T细胞RORyt、p-JAK1、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平。3.3在JAK1/JAK2抑制剂ruxolitinib或STAT3抑制剂BBI608存在的条件下,烟曲霉菌刺激的DCs或rmTSLP处理均不能促进CD4+T细胞中IL-17A、IL-17F和IL-22表达。3.4烟曲霉菌诱导的小鼠角膜炎模型中,结膜下预注射ruxolitinib或BBI608抑制小鼠真菌性角膜炎进展和角膜组织中IL-17A、IL-17F和IL-22表达。4.研究结论4.1烟曲霉菌刺激的DCs通过分泌TSLP激活CD4+T细胞中JAK/STAT信号通路。4.2烟曲霉菌刺激的DCs通过JAK/STAT信号通路诱导Th17型炎症反应。4.3烟曲霉菌通过JAK/STAT信号通路加剧小鼠真菌性角膜炎进展。第三部分cGAS-STING通路促进真菌性角膜炎免疫炎症反应机制研究1.研究目的本部分旨在研究cGAS-STING信号通路在烟曲霉菌刺激的HCECs以及小鼠真菌性角膜炎模型中的激活水平。明确cGAS-STING信号通路在烟曲霉菌诱导的HCECs炎症反应和小鼠真菌性角膜炎中的作用。2.研究方法2.1烟曲霉菌刺激HCECs 3、6、12和24小时,使用qRT-PCR和ELISA检测HCECs 中 TNF-α、IL-1β、IL-6 和 IFN-β 表达水平。2.2烟曲霉菌刺激HCECs 3、6和12小时,使用Western blot检测HCECs中cGAS、STING、p-STING、TBK1 和 p-TBK1 的蛋白水平,使用 ELISA 检测HCECs培养上清中cGAMP表达水平。2.3使用慢病毒转染方法构建稳定敲低cGAS的HCECs细胞系。烟曲霉菌刺激对照组和稳定敲低cGAS的HCECs 12小时,使用Western blot检测HCECs中cGAS、STING、p-STING、TBK1 和 p-TBK1 的蛋白水平,使用 qRT-PCR 和ELISA检测HCECs中TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-β表达水平。在稳定敲低cGAS的HCECs中再次转染PCMV-cGAS,烟曲霉菌刺激12小时,再次检测TNF-α、IL-1β、IL-6 和 IFN-β 表达水平。2.4在cGAS特异性抑制剂RU.521存在的条件下,使用烟曲霉菌刺激HCECs 12 小时,然后使用 Western blot 检测 HCECs 中 cGAS、STING、p-STING、TBK1和p-TBK1的蛋白水平,使用qRT-PCR和ELISA检测HCECs中TNF-α、IL-1β、IL-6 和 IFN-β 表达水平。2.5小鼠结膜下预注射RU.521或cGAS siRNA,然后使用烟曲霉菌感染小鼠角膜1天和3天。使用裂隙灯观察拍照、荧光素染色、H&E染色评估小鼠角膜炎进展。对小鼠角膜炎进行临床评分。使用ELISA检测角膜组织中cGAMP表达水平。使用免疫荧光检测小鼠角膜组织中p-STING和p-TBK1蛋白水平。使用qRT-PCR和ELISA检测小鼠角膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-β表达水平。3.研究结果3.1 qRT-PCR和ELISA结果显示,烟曲霉菌促进HCECs中TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-β等炎症因子表达。3.2烟曲霉菌提高HCECs中cGAMP蛋白水平。Western blot结果显示烟曲霉菌以时间依赖的方式提高HCECs中cGAS、p-STING和p-TBK1的蛋白水平。3.3烟曲霉菌刺激条件下,稳定敲低cGAS的HCECs中cGAMP、cGAS、p-STING和p-TBK1的蛋白水平明显低于对照组。在敲低cGAS的HCECs中,烟曲霉菌不能提高细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-β的mRNA和蛋白水平。而再次过表达cGAS则恢复烟曲霉菌诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-β表达水平的升高。3.4 Western blot结果表明,在cGAS抑制剂RU.521存在的条件下,烟曲霉菌不能提高 HCECs 中 cGAS、p-STING 和 p-TBK1 的表达水平。qRT-PCR 和 ELISA结果显示,RU.521处理显着抑制烟曲霉菌诱导的HCECs中TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-β表达水平的升高。3.5烟曲霉菌诱导的小鼠角膜炎模型中,结膜下预注射RU.521或cGAS siRNA可以明显减缓小鼠角膜炎进展并且抑制烟曲霉菌感染诱导的小鼠角膜组织中cGAMP、p-STING和p-TBK1的蛋白水平的升高。qRT-PCR和ELISA结果显示,RU.521或cGAS siRNA也可以抑制烟曲霉菌感染诱导的小鼠角膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 和 IFN-β 的表达。4.研究结论4.1烟曲霉菌感染激活HCECs和小鼠角膜组织中cGAS-STING信号通路。4.2烟曲霉菌感染通过cGAS-STING信号通路促进HCECs和小鼠角膜组织中炎症反应。4.3抑制cGAS活性减缓烟曲霉菌诱导的小鼠角膜炎进展。
游惠芬,袁敏,陈晓芳[4]（2021）在《球结膜下注射并发症的预防及全面护理对策分析》文中研究指明目的:探讨球结膜下注射并发症的预防及全面护理对策。方法:2018年1月-2019年12月收治行球结膜下注射的患者126例,注射时患者取仰卧位,在眼部采用0.4%盐酸奥布卡因滴眼液进行表面麻醉,嘱咐患者眼球进行固视动作的训练;操作前向患者耐心讲解操作的大致流程,缓解患者焦虑紧张情绪,并给予全程护理。评估患者并发症及护理对策。结果:126例患者中,出现球结膜下出血2例,药物渗漏1例,角膜损伤1例,青光眼0例,并发症发生率为3.17%。结论:球结膜下注射并发症的预防,需要严格遵守注射的操作规范,并提高注射操作的技巧,避免对无关组织造成损害。同时配合全面护理对于患者的眼部健康也具有重要的意义,可减轻患者检查过程和注射过程的紧张情绪,从而确保治疗过程顺利进行和减少并发症的发生。
卢一[5]（2016）在《miRNA靶向疗法和ZY-1多肽抑制角膜新生血管的研究》文中提出目的:探索miRNA靶向疗法和ZY-1多肽对角膜新生血管（neovascularization,NV）的抑制作用,研究其分子作用机制,并评估其眼用安全性。方法:（1）在碱烧伤诱导的小鼠角膜NV模型中,运用Nanostring技术和生物信息学方法检测筛选与NV相关的microRNA（miRNA）及其靶点基因,用RT-qPCR法检测候选miRNA的表达水平。构建候选miRNA相关质粒,以重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus,rAAV）为载体包装质粒。分别在碱烧伤前角膜基质内注射或碱烧伤后结膜下注射miRNA病毒颗粒、空白颗粒及PBS溶剂,通过活体测量和免疫荧光法测算角膜NV面积及其变量。运用RT-qPCR和Western Blot检测候选miRNA、miRNA靶点基因及其信号通路关键因子的表达水平。以正常小鼠为对象,分别角膜基质内或结膜下注射miRNA病毒颗粒和PBS溶剂,活体观察和组织病理学分析其眼部情况。（2）制备来源于人类胎盘生长因子-1（placenta growth factor-1,PlGF-1）的新型多肽ZY-1。用CCK-8和基质胶实验检测ZY-1多肽对VEGF或PlGF诱导的内皮细胞增殖和管腔形成的作用。分别检测眼表滴用ZY-1多肽对大鼠角膜碱烧伤、缝线及小鼠角膜微囊袋诱导的角膜NV抑制作用。用CCK-8检测高浓度ZY-1对人角膜上皮细胞（human corneal epithelial cell,HCEC）的活性影响;以泪膜破裂时间（tear film break-up time,BUT）、组织病理学及电镜分析连续滴用高浓度ZY-1多肽的眼用安全性。结果:（1）共检测618种miRNA在碱烧伤诱导的小鼠角膜NV中的表达,发现35种miRNA表达上调,3种下调。其中miR-184和miR-204的表达水平比对照组降低10倍以上。筛选14种rAAV血清型,并选用能高效感染小鼠角膜的rAAVrh.10包装表达pri-miR184/204的病毒颗粒。相较于对照组,碱烧伤前角膜基质内注射或碱烧伤后结膜下注射rAAVrh.10 pri-miR184/204的小鼠角膜NV面积显着降低。过表达miR-184导致靶基因Fzd4表达下调,抑制Wnt/β-catenin通路激活;过表达miR-204导致靶基因Angpt1表达下调,抑制Angiopoietin-1/Tie2/PI3K/Akt通路激活。大体观察及组化分析表明rAAVrh.10 pri-miR184/204对正常小鼠角结膜及眼底结构无明显影响。（2）多肽ZY-1显着抑制VEGF/PlGF诱导的内皮细胞增殖和管腔形成。眼表滴用ZY-1多肽显着抑制碱烧伤、缝线和VEGF诱导的角膜NV形成。高浓度ZY-1多肽对HCEC细胞活性、大鼠BUT及角结膜结构均无明显影响。结论:（1）过表达miR-184/204可有效预防或治疗角膜NV,其作用可能分别通过靶向抑制Fzd4/Wnt/β-catenin和Angpt1/Tie2/PI3K/Akt通路实现。（2）眼表滴用ZY-1多肽可有效抑制角膜NV。
王萍[6]（2013）在《球结膜下注射并发症的预防及护理》文中提出目的探讨球结膜下注射并发症的预防,总结球结膜下注射的护理体会。方法对2011年3—12月收治的231例患者进行球结膜下注射,评估患者注射前的心理状态和治疗后的感受。结果接受球结膜下注射的患者,无痛195例,轻微疼痛28例,疼痛8例;仅有5例发生并发症。结论严格按照操作规程可有效避免并发症的发生,熟练的操作是注射成功的保证。
黄薇[7]（2012）在《球结膜下注射的操作方法与护理体会》文中研究表明目的总结球结膜下注射的操作技术与护理经验。方法用不同药物、不同体位对248例（270眼）患者进行球结膜下注射,评估患者治疗前的心理状态和治疗后的疗效。结果 248例（270眼）患者经球结膜下注射治疗后,无球结膜下充血者,痊愈261眼,显效7眼,好转2眼,无一例发生不良反应。结论对患者进行心理护理和熟练地掌握不同体位的球结膜下注射的操作方法以保证球结膜下注射的成功。
刘艳[8]（2012）在《青光安有效组份对青光眼术后滤过道瘢痕组织成纤维细胞和Ⅰ型胶原蛋白的影响》文中研究说明目的 观察青光安4种有效组份对青光眼术后滤过道瘢痕组织成纤维细胞和I型胶原蛋白的影响,探讨青光安有效组份抗青光眼术后滤过道瘢痕化的效果及作用机制,并初步判断青光安有效组份的安全性。方法 将健康成年新西兰长耳白兔42只,体重1.8-2.2kg,采用随机数字法分为7组,每组6只。分别为:A组:空白组;B组:模型组;C组:MMC对照组;D组:有效组份1组;E组:有效组份2组;F组:有效组份3组;G组:有效组份4组。将B、C、D、E、F、G六组实验动物兔眼行常规小梁切除+虹膜根部切除术;C组在术中联合应用MMC;A组不做任何处理。各组在造模后第2天开始用药。各组实验动物分别于术后测量眼压,观察滤过泡形成情况;检查术口愈合及眼部一般情况。用药4周后处死各组动物,取术眼滤过道全层组织,HE染色后观察滤过性手术术区组织形态及成纤维细胞个数,用免疫组织化学的方法对滤过泡区域Tenon囊组织中I型胶原蛋白的表达进行检测。结果 术后C、E组眼压回升缓慢,第4周时眼压仍为最小,该两组眼压值与A、B、D、F、G组眼压值比较差异均有统计学意义。C组和E组术后都能维持有效滤过泡,B组滤过泡在术后两周内基本都变为无功能滤过泡或滤过泡消失,D、F、G组在术后第4周都有部分滤过泡存在。成纤维细胞个数组间比较,除D组与F组间P>0.05,差异无明显统计学意义外,其他各组间比较差异均有意义。Ⅰ型胶原蛋白的表达除C组与E组、B组与G组、F组与G组组间胶原表达差异无明显统计学意义,其他组间两两比较结果均为P<0.05,差异具有明显统计学意义。术后一般情况及第4周标本光镜观察,MMC组有一眼出现术后并发症,各有效组份组眼部组织结构未见异常病变。结论（1）青光眼术后滤过道瘢痕化,是导致术后眼压异常回升,滤过性手术失败的重要原因。（2）在正常兔眼上行常规小梁切除+虹膜根部切除术,可成功建立滤过性手术模型。（3）青光安有效组份2和MMC都可通过抑制成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少瘢痕组织增生,具有明显的抗青光眼术后滤过道瘢痕化的作用。（4）通过实验观察可初步说明青光安有效组份2 口服给药,无明显毒副作用,安全性优于MMC。可能成为抗青光眼术后滤过道瘢痕化,提高手术成功率的一个全新安全药物。
陈卫芳,陈振谦[9]（2011）在《不同病种不同部位结膜下注射方法及护理探讨》文中提出[目的]探讨结膜下注射最佳注射部位和护理方法。[方法]135例结膜下注射病人,针对不同病因、不同病种因人而异采取相应、有效的注射部位及护理措施。[结果]内眼术前及术后前眼部炎症的病人,结膜下注射部位应采取下方球结膜为宜;化学性烧伤早期病人的结膜下注射部位应采取穹窿部结膜为佳;其余病例结膜下注射部位,最好取颞上方球结膜为妥。[结论]针对性地选择结膜下最佳注射部位和护理,有效地预防并发症发生,真正达到了结膜下注射的目的。
唐玉花,许奕如,舒香云,叶森娣,郑小英[10]（2010）在《球旁注射与球结膜下注射法治疗虹膜睫状体炎的比较研究》文中指出目的探讨球旁注射与球结膜下注射2种注射方法对治疗虹膜睫状体炎的不同效果。方法将80例虹膜睫状体炎患者按来院顺序随机分为A组与B组各40例,A组患者行球旁注射,B组患者行球结膜下注射。比较2组注射后并发症发生情况。结果 2组患者在实施治疗后的并发症及相关因素比较差异显着,球旁注射法优于球结膜下注射法。结论球旁注射法是治疗虹膜睫状体炎理想的用药途径,操作简便、安全、快捷、痛苦小,值得推广。
二、眼球结膜下注射体会（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、眼球结膜下注射体会（论文提纲范文）
（1）AQP5通过激活Akt信号通路促进角膜上皮损伤修复和神经再生（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验仪器设备 |
| 1.2 实验耗材 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要试剂配置方法 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 免疫荧光染色 |
| 2.3 蛋白质印记法(western blot) |
| 2.4 角膜神经染色 |
| 2.5 角膜敏感度测量 |
| 2.6 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qRT-PCR) |
| 2.7 统计学分析 |
| 结果 |
| 3.1 AQP5敲除小鼠基因型鉴定 |
| 3.2 AQP5在小鼠角膜上皮中的表达与定位 |
| 3.3 AQP5敲除抑制小鼠角膜上皮损伤修复速度 |
| 3.4 AQP5敲除抑制小鼠角膜上皮细胞增殖和角膜神经再生 |
| 3.5 AQP5通过影响NGF调控角膜神经的再生 |
| 3.6 AQP5敲除抑制Akt信号通路的激活 |
| 3.7 在AQP5~(-/-)小鼠中,NGF促进角膜上皮损伤修复和神经再生 |
| 3.8 在AQP5~(-/-)小鼠中,NGF通过激活Akt信号通路促进角膜上皮损伤修复和神经再生 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 水通道蛋白在眼中的表达及其与眼部疾病关系的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 附录 |
| 致谢 |
（2）药物联合手术治疗猫难治性角膜溃疡的疗效分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词（Abbreviations） |
| 第1章 引言 |
| 1.1 角膜的基本结构与机理特点 |
| 1.1.1 角膜的基本结构 |
| 1.1.2 角膜结构的机理特点 |
| 1.2 角膜溃疡诱因及病因 |
| 1.2.1 真菌性角膜溃疡 |
| 1.2.2 细菌性角膜溃疡 |
| 1.2.3 病毒性角膜溃疡 |
| 1.3 角膜溃疡症状 |
| 1.4 难治性角膜溃疡的发生 |
| 1.5 角膜溃疡诊断方法 |
| 1.6 难治性角膜溃疡的治疗 |
| 1.6.1 药物治疗 |
| 1.6.2 药物联合手术治疗 |
| 1.7 研究的目的和意义 |
| 第2章 难治性角膜溃疡的诊断与治疗 |
| 2.1 病例、诊断仪器及治疗药物 |
| 2.1.1 临床病例 |
| 2.1.2 主要仪器设备及材料 |
| 2.1.3 试验主要药品 |
| 2.2 诊断及结果分析 |
| 2.2.1 临床检查 |
| 2.2.2 眼科检查 |
| 2.2.3 实验室检查 |
| 2.2.4 纳入标准 |
| 2.2.5 排除标准 |
| 2.2.6 角膜溃疡分级 |
| 2.2.7 治疗原则 |
| 2.2.8 临床检查结果 |
| 2.2.9 眼科学检查结果 |
| 2.3 治疗及结果分析 |
| 2.3.1 药物治疗 |
| 2.3.2 手术治疗 |
| 2.3.3 术后护理 |
| 2.3.4 疗效评判 |
| 2.3.5 治疗结果及分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 难治性角膜溃疡的诊断 |
| 2.4.2 难治性角膜溃疡的治疗 |
| 第3章 典型病例分析 |
| 3.1 病例分析 1:药物联合手术治疗疱疹病毒所致角膜溃疡 |
| 3.2 病例分析 2:药物联合手术治疗猫复杂性角膜溃疡 |
| 3.3 小结 |
| 3.4 角膜溃疡的预防 |
| 第4章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）TSLP及cGAS-STING调控角膜抗真菌感染免疫反应的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 烟曲霉菌刺激DCs分泌TSLP诱导Th17型炎症反应研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 主要材料试剂与仪器设备 |
| 3 实验方法 |
| 4. 实验结果 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 第二部分 TSLP通过JAKfSTAT信号通路诱导Th17炎症反应机制研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 主要材料试剂与仪器设备 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 实验结果 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 第三章 cGAS-STING通路促进真菌性角膜炎免疫炎症反应机制研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 主要材料试剂与仪器设备 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 实验结果 |
| 5. 讨论 |
| 6. 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的主要学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
（4）球结膜下注射并发症的预防及全面护理对策分析（论文提纲范文）
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
（5）miRNA靶向疗法和ZY-1多肽抑制角膜新生血管的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 第一部分 miRNA靶向疗法抑制角膜新生血管的作用及机制研究 |
| 1.新生血管化角膜miRNA表达谱分析及新生血管相关miRNA筛选 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.5 讨论 |
| 2.高效感染小鼠角膜的重组腺相关病毒(rAAV)血清型筛选 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 3.过表达miR-184/miR-204 抑制角膜新生血管的有效性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 4.miR-184和miR-204 抗新生血管作用的分子机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 5.过表达miR-184/miR-204 的安全性研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.5 讨论 |
| 第二部分 眼表滴用ZY-1多肽抑制角膜新生血管的作用研究 |
| 6.多肽ZY-1 抑制VEGF/PlGF诱导的血管内皮细胞行为的有效性研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.5 讨论 |
| 7.眼表滴用多肽ZY-1 抑制角膜新生血管的有效性研究 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 实验材料 |
| 7.3 实验方法 |
| 7.4 实验结果 |
| 7.5 讨论 |
| 8.眼表滴用多肽ZY-1 的安全性研究 |
| 8.1 引言 |
| 8.2 实验材料 |
| 8.3 实验方法 |
| 8.4 实验结果 |
| 8.5 讨论 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文和科研成果目录 |
（6）球结膜下注射并发症的预防及护理（论文提纲范文）
| 1 临床资料 |
| 2 护理 |
| 2.1 注射前护理 |
| 2.1.1 用物的选择 |
| 2.1.2 患者准备 |
| 2.1.3 注射方法 |
| 2.1.4 疗效评价 |
| 2.2 注射后的观察及护理 |
| 2.2.1 球结膜下出血 |
| 2.2.2 药液渗漏 |
| 2.2.3 角膜损伤 |
| 2.2.4 青光眼 |
| 2.2.5 球结膜筋膜瘢痕形成 |
（7）球结膜下注射的操作方法与护理体会（论文提纲范文）
| 1 临床资料 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 治疗方法 |
| 1.3 护理效果 |
| 2 护理 |
| 2.1 医患双方的心理调适。 |
| 2.2 严格无菌操作。 |
| 2.3 操作时的注意事项 |
| 2.3.1 操作前准备宜充分。 |
| 2.3.2 操作中注意事项。 |
| 2.4 特殊患者操作方法 |
| 2.5 操作后的注意事项 |
（8）青光安有效组份对青光眼术后滤过道瘢痕组织成纤维细胞和Ⅰ型胶原蛋白的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要设备和手术器械 |
| 1.3 主要药品和试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 青光眼滤过手术动物模型的建立 |
| 2.3 给药方法 |
| 2.4 青光眼术后的常规检查 |
| 2.5 标本采集及处理 |
| 2.6 滤过性手术术区组织形态检查 |
| 2.7 手术区结膜下成纤维细胞增殖情况 |
| 2.8 滤过泡区域内Tenon囊组织中Ⅰ型胶原蛋白的表达 |
| 3 统计学处理 |
| 第二部分 结果 |
| 1 青光眼术后的常规检查结果 |
| 1.1 眼压 |
| 1.2 滤过泡形成情况 |
| 1.3 术口愈合情况及前房深浅炎性反应 |
| 2 滤过性手术术后标本的光镜观察 |
| 2.1 正常对照组(A组) |
| 2.2 手术对照组(B组) |
| 2.3 MMC对照组(C组) |
| 2.4 组份1治疗组(D组) |
| 2.5 组份2治疗组(E组) |
| 2.6 组份3治疗组(F组) |
| 2.7 组份4治疗组(G组) |
| 3 手术区结膜下成纤维细胞增殖情况 |
| 4 滤过泡区域内Tenon囊组织中Ⅰ型胶原蛋白的表达 |
| 第三部分 分析与讨论 |
| 1 滤过道瘢痕形成情况与手术成败 |
| 2 成纤维细胞、Ⅰ型胶原蛋白与滤过道瘢痕形成的关系 |
| 3 青光眼滤过手术动物模型的建立 |
| 4 青光安组份对滤过道瘢痕形成的影响 |
| 5 青光安有效组份的安全性 |
| 6 问题与展望 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 青光眼滤过手术联合中西药物治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
（9）不同病种不同部位结膜下注射方法及护理探讨（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 物品准备 |
| 1.2.2 操作步骤 |
| 2 护理 |
| 2.1心理护理 |
| 2.2 出血护理 |
| 2.3 疼痛护理 |
| 2.4 小儿护理 |
| 2.5 更换注射部位 |
| 2.6 复诊 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
四、眼球结膜下注射体会（论文参考文献）
- [1]AQP5通过激活Akt信号通路促进角膜上皮损伤修复和神经再生[D]. 刘雅宁. 青岛大学, 2021(02)
- [2]药物联合手术治疗猫难治性角膜溃疡的疗效分析[D]. 罗瑞. 塔里木大学, 2021(08)
- [3]TSLP及cGAS-STING调控角膜抗真菌感染免疫反应的作用及机制研究[D]. 韩芳. 山东大学, 2021(11)
- [4]球结膜下注射并发症的预防及全面护理对策分析[J]. 游惠芬,袁敏,陈晓芳. 中国社区医师, 2021(11)
- [5]miRNA靶向疗法和ZY-1多肽抑制角膜新生血管的研究[D]. 卢一. 上海交通大学, 2016
- [6]球结膜下注射并发症的预防及护理[J]. 王萍. 现代医药卫生, 2013(18)
- [7]球结膜下注射的操作方法与护理体会[J]. 黄薇. 现代医药卫生, 2012(18)
- [8]青光安有效组份对青光眼术后滤过道瘢痕组织成纤维细胞和Ⅰ型胶原蛋白的影响[D]. 刘艳. 湖南中医药大学, 2012(05)
- [9]不同病种不同部位结膜下注射方法及护理探讨[J]. 陈卫芳,陈振谦. 全科护理, 2011(06)
- [10]球旁注射与球结膜下注射法治疗虹膜睫状体炎的比较研究[J]. 唐玉花,许奕如,舒香云,叶森娣,郑小英. 中国实用护理杂志, 2010(12)