一、庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达（论文文献综述）
张亮[1]（2021）在《基于中医象思维探讨肾衰饮干预慢性肾功能衰竭大鼠的机制研究》文中提出目的:基于中医象思维研究肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路、Fas/Fas L介导的凋亡途径、PI3K/Akt信号通路的影响,探讨该方防治慢性肾功能衰竭的作用机制。材料与方法:选取6周龄SPF级健康雄性SD大鼠84只,随机抽取12只大鼠为正常组,其余72只为造模组。造模组大鼠应用腺嘌呤（200mg/（kg·d））灌胃3周建立慢性肾功能衰竭大鼠模型,将造模成功大鼠再随机分为模型组、肾衰饮组、尿毒清组、P13K抑制剂组（LY组）及肾衰饮+LY组。正常组和模型组予0.9%Nacl溶液8ml/（kg·d）灌胃。肾衰饮组给予中药复方汤剂肾衰饮煎剂按生药量33.3g/（kg·d）灌胃。尿毒清组给予尿毒清颗粒以2.25g/（kg·d）浓度灌胃。LY组给予腹腔注射P13K抑制剂（LY294002）稀释液50mg/kg,周一次。肾衰饮+LY组在给予肾衰饮煎剂按生药量33.3g/（kg·d）灌胃基础上腹腔注射LY294002稀释液50mg/kg,周一次。以上各组大鼠均连续用药4周。各组分别留取大鼠血清及肾组织,检测各项指标。实验一:观察大鼠一般状态,肉眼观察肾脏外观形态,光镜下观察大鼠肾组织病理改变及TUNEL染色法检测凋亡细胞情况。全自动生化分析仪检验大鼠血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平。实验二:免疫印迹法（Western Blot法）和免疫组织化学法检测大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达情况。实验三:Western Blot法检测肾脏组织Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达情况。实验四:Western Blot法检测肾脏组织Akt、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达情况。结果:1肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏形态学及肾功能的影响1.1肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠一般状态的影响正常组:精神状态良好,毛色光泽,较少有脱毛现象,活动正常,反应灵活,每日进食量及饮水量均正常,垫料气味较淡,大鼠便质如常排便未见异常。模型组:体重明显下降,精神状态萎靡,毛色干枯晦暗,并出现脱毛现象,反应迟钝,活动减少,进食量减少,饮水量增加,垫料气味臭秽,稀便。尿毒清组:体重不同程度下降,精神状态萎靡,毛色干枯、脱落,精神中度萎靡,反应略有迟钝,活动减少,进食量减少,饮水量增多,垫料气味臭秽,稀便。肾衰饮组:体重不同程度下降,精神轻度萎靡,毛色干枯脱毛现象较轻,反应尚可,活动度尚可,进食量尚可,饮水量略增加,垫料气味臭秽,可见便质如常排便未见异常。1.2肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏形态学的影响1.2.1肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏组织外观形态的影响与正常组比较,其余各组大鼠肾脏体积均不同程度的增大,其中模型组改变最为明显,尿毒清组其次,最后为肾衰饮组。与正常组比较,模型组大鼠肾脏组织表面均呈弥漫性细颗粒状改变,凹凸不平,被膜粘连,不易剥离,且外观颜色均明显发白,肉眼观察外观颜色发白程度:模型组>尿毒清组>肾衰饮组>正常组。沿肾门纵行剖开,除空白组外各组肾组织切面处均可见肾皮质不同程度变薄,且皮髓质界限欠清晰,其中模型组最明显,其他各组肉眼观察无明显区别。1.2.2肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠体质量及肾指数的影响各组大鼠实验前及造模第1周体质量比较无明显差异;与正常组比较,第2周、第3周造模组大鼠体质量明显降低（P<0.05）;治疗期间:第1周:与正常组比较,模型组、尿毒清组和肾衰饮组大鼠体质量明显降低（P<0.01）;第2周和第3周:与正常组比较,模型组与尿毒清组大鼠体质量明显降低（P<0.05）,肾衰饮组无明显差异;与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组大鼠体质量无明显差异;第4周:与正常组比较,模型组、尿毒清组和肾衰饮组大鼠体质量明显降低（P<0.01）,肾指数明显升高（P<0.01）,与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组大鼠体质量明显升高（P<0.05）,肾指数降低（尿毒清组P<0.01,肾衰饮组P<0.05）,尿毒清组与肾衰饮组大鼠体质量、肾指数比较无明显差异。1.2.3肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏病理学的影响苏木精-伊红（HE）染色结果:正常组可见肾小球、肾小管、系膜结构正常,间质未见增宽,无炎性细胞浸润。模型组可见肾小球囊腔变大,部分肾小管萎缩,小管的管壁薄厚不匀,肾小管上皮细胞弥漫空泡变性,成纤维细胞增多,系膜细胞增生明显,肾小球周围可见大量炎性细胞浸润。尿毒清组可见肾小管上皮细胞空泡变性减轻,系膜细胞轻度增生,部分区域伴有炎性细胞浸润。肾衰饮组可见成纤维细胞减少,系膜细胞轻度增生,部分区域伴有炎性细胞浸润。肾衰饮组在肾小管上皮细胞空泡变性及系膜细胞增生程度均低于尿毒清组。1.3肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠血清Scr、BUN水平的影响与正常组比较,模型组血清Scr、BUN水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组血清Scr、BUN水平均明显降低（P<0.01）,尿毒清组和肾衰饮组比较无统计学差异。2肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏细胞凋亡情况的影响TUNEL染色后显微镜下观察:正常组大鼠肾脏组织中细胞正常,未见阳性细胞;模型组大鼠肾脏细胞凋亡数量明显增多,且主要分布在髓质区;尿毒清组和肾衰饮组大鼠肾脏细胞凋亡指数较模型组降低（P<0.01）;尿毒清组和肾衰饮组相比差异无统计学意义。3肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平的影响ELISA法检测大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平:与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平均明显降低（P<0.01）;与尿毒清组比较,肾衰饮组大鼠血清IL-6、TNF-α表达水平降低（P<0.05）。4肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平的影响Western blot法检测肾脏组织内TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平:与正常组相比,模型组大鼠肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）;与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组大鼠肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）,尿毒清组和肾衰饮组比较无统计学差异。免疫组织化学法检测各组大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达情况:光镜下观察,正常组肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达为阴性,模型组TLR4、MyD88、NF-κB蛋白呈强阳性表达,尿毒清颗粒和肾衰饮干预后均能不同程度的减少TLR4、MyD88、NF-κB蛋白的表达（P<0.01）,且两组之间无明显差异。5肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏组织Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达的影响Western blot法检测肾脏组织Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达:与正常组比较,模型组大鼠肾脏组织Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达水平显着增高（P<0.01）;与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组大鼠肾脏组织Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）;尿毒清组和肾衰饮组相比差异均无显着性意义。6肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏组织PI3K/Akt信号通路蛋白表达的影响各组大鼠肾脏组织Akt蛋白表达无明显差异。与正常组比较,模型组大鼠肾脏组织p-Akt蛋白表达水平降低（P<0.01）,p-Akt/Akt比值降低（P<0.01）;与模型组比较,P13K抑制剂组（LY组）大鼠肾脏组织p-Akt蛋白表达水平显着降低（P<0.01）,p-Akt/Akt比值显着降低（P<0.01）;与LY组比较,肾衰饮+LY组大鼠肾脏组织p-Akt蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,p-Akt/Akt比值显着升高（P<0.01）。结论:1基于中医象思维,根据肾藏象的病理之象,提出脾肾虚损是慢性肾功能衰竭发生和发展的病理基础,是产生毒邪的根源;毒邪（湿毒、痰毒、瘀毒）是加重病情进展恶化及迁延不愈的重要外因,证属本虚标实。2拟“抗毒、解毒、排毒”三法于一方,肾衰饮健脾益肾扶正以抗毒;祛湿涤痰化瘀以解毒;通腑泄浊以排毒,攻补兼施。3根据以上病因病机、治则治法,实验研究表明:（1）肾衰饮能够明显改善腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭模型大鼠的一般状态及肾功能,减轻肾脏组织病理损伤,抑制肾脏炎症反应和细胞凋亡,进一步抑制肾脏纤维化,达到治疗慢性肾功能衰竭的目的;（2）肾衰饮能够降低腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭模型大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达,从而抑制炎症反应,减轻肾脏炎性损伤;（3）肾衰饮能够降低腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭模型大鼠Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表达水平,对肾脏细胞凋亡起到抑制作用;（4）肾衰饮可能通过激活PI3K/Akt信号通路,进一步抑制其下游的效应靶点Fas L来抑制慢性肾功能衰竭大鼠肾脏细胞凋亡。
周柳新[2]（2021）在《电针三焦经腧穴联合金匮肾气丸干预庆大霉素诱发大鼠耳、肾毒性的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:本实验通过建立因庆大霉素诱发的耳、肾毒性大鼠模型,观察三焦经络的良性电针刺激、从肾论治方药及针药并举三种防治方法分别对庆大霉素诱发的耳肾损伤大鼠耳蜗、肾组织形态学的影响,对肾脏组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）含量及血清中血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）水平的影响,探讨针药并举对庆大霉素诱发耳、肾毒性大鼠的可能作用机制。材料和方法:选择健康雄性SD大鼠40只,适应性喂养一周后进行听性脑干反应（ABR）检测,之后随机分为空白组、模型组、电针组、中药组和针药组,每组8只。空白组生理盐水肌肉注射14d,1次/d,不处理。模型组庆大霉素（120mg/kg）肌肉注射14d,1次/d,不处理。电针组、中药组和针药组庆大霉素剂量和方法同模型组。电针组在造模同时每天给予针刺双侧“翳风”“外关”“阳池”穴,针刺后加电针,留针20min,左右两侧交替进行,1次/d,连续治疗14d。中药组在造模同时每天给予金匮肾气丸灌胃,大鼠灌胃5ml/kg/d,1次/d,连续治疗14d。针药组同时给予电针组和中药组的干预措施。治疗结束后所有大鼠再次进行ABR检测后处死,取耳蜗、肾观察组织形态学的病理变化,酶联免疫吸附测定法检测肾脏组织中TNF-α、MCP-1、MIP-2的含量变化,全自动生化分析仪测定血清中Scr、BUN的水平变化。结果:1.听性脑干反应（ABR）检测结果显示:实验前各组大鼠ABR阈值较低,且五组大鼠ABR反应阈值比较差异无统计学意义（P>0.05）。实验14d后比较:与空白组相比,模型组、电针组、中药组ABR阈值均升高（P<0.01）,针药组的改善较为明显（P<0.05）;与模型组相比,中药组ABR阈值降低（P<0.05）,电针组和针药组的降低更为明显（P<0.01）;与中药组相比,电针组ABR阈值略低,但二者之间差异不显着;与电针组和中药组相比,针药组的下降幅度更显着（P<0.01）。2.苏木素-伊红染色法检测结果显示:观察耳蜗组织病理改变:空白组大鼠耳蜗组织形态正常,螺旋神经节形态结构完整,神经细胞数量、形态正常,毛细胞分布整齐、排列有序;与空白组相比,模型组大鼠耳蜗组织形态结构出现严重损伤现象,螺旋神经节发生明显病理改变,神经细胞数量缺失,边界模糊不清,毛细胞缺失明显,排列紊乱;与模型组相比,中药组、电针组、针药组耳蜗组织形态结构的损伤均有所减轻,螺旋神经节病理变化减轻,细胞数量有少量缺失,界限较清晰,毛细胞数量缺失较少,排列较整齐,其中以针药组的改善效果更为显着。观察肾脏病理改变结果显示:空白组大鼠肾组织形态正常,肾小球及肾小管结构完整。与空白组相比,模型组大鼠出现明显肾损伤现象,肾小管结构异常,可见肾小管上皮细胞空泡变性,且肾间质炎性细胞浸润明显;与模型组相比,电针组、中药组、针药组大鼠肾损伤现象均有一定程度的减轻,炎性细胞浸润减少,以针药组的改善作用更为显着。3.酶联免疫吸附测定法检测结果显示:大鼠肾脏组织中TNF-α含量:与空白组相比,模型组、电针组、中药组、针药组大鼠肾脏组织中TNF-α含量均升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组、中药组、针药组TNF-α含量均降低（P<0.01）;与电针组相比,中药组TNF-α含量略低于电针组,但二者之间差异不显着;与电针组和中药组相比,针药组降低更显着（P<0.01）。大鼠肾脏组织中MCP-1含量:与空白组相比,模型组、电针组、中药组大鼠肾脏组织中MCP-1含量均升高（P<0.01）,针药组的改善较为明显（P<0.05）;与模型组相比,电针组、中药组、针药组MCP-1含量均下降（P<0.01）;与电针组相比,中药组MCP-1含量下降（P<0.05）,针药组的下降更明显（P<0.01）;与中药组相比,针药组降低更显着（P<0.01）。大鼠肾脏组织中MIP-2含量:与空白组相比,模型组、电针组、中药组、针药组大鼠肾脏组织中MIP-2含量均升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组、中药组、针药组MIP-2均下降（P<0.01）;与电针组相比,中药组、针药组MIP-2含量显着降低（P<0.01）;与中药组相比,针药组降低更显着（P<0.01）。4.血清中Scr、BUN水平检测结果显示:血清中Scr水平:与空白组相比,模型组、电针组、中药组、针药组大鼠血清中Scr水平均升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组Scr水平降低（P<0.05）,中药组、针药组降低更为明显（P<0.01）;与电针组相比,中药组、针药组Scr水平明显降低（P<0.01）;与中药组相比,针药组水平降低更显着（P<0.01）。血清中BUN水平:与空白组相比,模型组、电针组、中药组、针药组大鼠血清中BUN水平均升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组BUN水平低于模型组,但二者之间差异不显着;与电针组相比,中药组、针药组BUN均明显降低（P<0.01）;与中药组相比,针药组的下降更显着（P<0.01）。结论:1.庆大霉素同时具有耳、肾毒性,可成功诱导大鼠出现耳毒性和肾毒性,建立耳肾损伤模型。2.三焦经络的良性电针刺激能够减轻大鼠由庆大霉素诱发的耳、肾毒性,能够增强从肾论治方药的防治效果。3.基于“肾与三焦相通”理论指导的针药结合的防治方法,可对因庆大霉素所致的肾功能下降起到良好的防治作用,能够明显降低肾脏组织中炎性因子含量,减轻肾脏损伤,并有效改善大鼠的听力损失情况。4.验证了针药并举疗法在防治药源性耳聋中发挥的重要作用。
潘雅婧[3]（2020）在《肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究》文中研究表明目的:以VEGF为切入点,在动物和细胞实验探讨肾康注射液对UUO小鼠肾纤维化和HUVEC血管生成的调控作用及作用机制。方法:1.动物实验:将雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组（sham）、单侧输尿管梗阻组（UUO）、氯沙坦钾组（ARB）及高、中、低剂量肾康组（SKI-H、SKI-M、SKI-L）。除sham组外的各组行UUO手术;次日ARB组予氯沙坦钾（13 mg/kg·d）灌胃;SK]-H、SKI-M、SKI-L 组分别予 7.8 g/kg·d、3.9 g/kg·d、1.95 g/kg·d SKI 尾静脉注射。观察小鼠一般状态、记录体重变化。给药14天后检测血Scr、BUN、CysC水平;micro-CT检测肾脏血管分布;HE染色观察肾组织形态改变;天狼星红染色观察胶原沉积;IHC染色观察VEGF、VEGFR-2表达。2.细胞实验:将HUVEC分为空白组（CON）、SKI高剂量组（SKI-11）、SKI-低剂量组（SKI-L）、VE GF 沉默组（Si）、VEGF 沉默-SKI 高剂量组（Si-SKI-H）、VEGF 沉默-SKI 低剂量组（Si-SKI-L）。SKI-H、SKI-L 组分别予 8 mg/ml、2 mg/ml SKI干预 24 h;Si组通过RNAi转染沉默VEGF基因;Si-SKI-H、Si-SKI-L组在转染同时分别予8 mg/ml、2 mg/ml SKI干预24 h。观察血管生成情况,计算血管生成参数;real-time PCR和western blot法分别检测VEGF通路重要靶点基因和蛋白表达。结果:1.动物实验:给药14天后UUO组体重较sham组减轻（P<0.01）;ARB、SKI-H、SKI-M组体重较UUO组增高（P<0.05）。UUO组Scr、BUN、CysC水平较sham组升高（P<0.05,P<0.01）;ARB、SKI-H 组 Scr、BUN、CysC 水平较 UUO 组降低（P<0.05,P<0.01）。肉眼观察sham组双肾无明显异常改变;UUO组患侧肾脏表面粗糙、膨大、积水,肾盂肾盏扩张,实质变薄;SKI组患肾结构破坏较UUO组减轻。micro-CT见sham组肾血管密集,走向清晰;UUO组患肾血管疏松,分支减少、曲度下降;SKI组患肾血管损伤较UUO组减轻。HE染色见sham组肾脏结构完整,无明显病理损害;UUO组肾小管扩张,上皮细胞肿胀坏死,间质增宽伴炎性浸润;SKI组肾脏损伤较UUO组减轻。天狼星红染色（光镜）见sham组肾脏几乎无红染胶原;UUO组肾间质大量红色胶原聚集;SKI组红染程度较UUO组减轻。偏振光镜荧光信号变化与普通光镜所见大体一致。IHC示UUO组患肾VEGF、VEGFR-2表达较sham组降低（P<0.01）;SKI 组 VEGF、VEGFR-2 表达较 UUO 组降低（P<0.01）。剂量方面,SKI 减轻肾脏纤维化损伤和促进血管生成,以中、高剂量效果更优。2.细胞实验:沉默VEGF 24 h后Si组VEGF基因表达较CON组显着降低（P<0.01）,阴性对照组与CON组VEGF无显着差异（P>0.05）,验证转染稳定可行。血管生成方面,SKI组血管连接较CON组增多、血管网密度增大,血管生成参数提高,SKI促进HUVEC血管生成（P<0.01,P<0.05）。基因表达方面,与CON组相比,SKI-H 组 VEGF、VEGFR-2、eNOS 水平升高（P<0.05,P<0.01）;与 Si 组相比,Si-SKI-H 和 Si-SKI-L 组 VEGF、eNOS 水平升高（P<0.05,P<O.01）,SKI 上调 VEGF 通路靶点基因,且该效应在VEGF沉默时更突出。蛋白表达方面,在正常培养及VEGF沉默状态,SKI 均提高 VEGFR-2、p-VEGFR-2、eNOS、p-eNOS 表达水平（P<0.05,P<0.01）。结论:1.肾康注射液可改善UUO小鼠肾功能,缓解肾纤维化病理改变,减轻纤维化损伤;可缓解肾脏微血管网损伤,上调VEGF、VEGFR-2表达,促进患侧肾脏血管生成。2.肾康注射液可促进HUVEC血管生成;可上调HUVEC的VEGF、VEGFR-2基因表达;可提高VEGFR-2、eNOS总蛋白水平及磷酸化蛋白水平。3.肾康注射液可能通过调节VEGF/VEGFR-2及下游eNOS来改善肾纤维化损伤和促进血管生成。
林嘉颖,陈淑仪,陈胜锋,王丙云,陈志胜,刘璨颖,白银山,计慧琴,谢仕廷[4]（2020）在《犬脂肪间充质干细胞及其外泌体修复庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤》文中进行了进一步梳理背景:犬肾脏损伤的特点是肾小管上皮细胞凋亡坏死。最近研究表明间充质干细胞及其外泌体在人、大鼠、小鼠肾损伤治疗中显示出良好的效果,但对犬的研究甚少。目的:探讨犬脂肪间充质干细胞及其外泌体对庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤的影响。方法:采用5 mmol/L硫酸庆大霉素处理犬肾小管上皮细胞,随后分别将犬脂肪间充质干细胞及其条件培养基和外泌体与受损犬肾小管上皮细胞共培养。在24 h及48 h后采用CCK-8法测定各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,最后通过Q-PCR法检测PCNA、Bcl-2和Bax基因的表达。结果与结论:犬脂肪间充质干细胞及其条件培养基和外泌体均可显着促进受损犬肾小管上皮细胞增殖以及减少细胞凋亡（P<0.05）,其中犬脂肪间充质干细胞外泌体的效果最好,可显着提高受损犬肾小管上皮细胞PCNA、Bcl-2基因的表达（P <0.05）,对庆大霉素诱导的犬肾小管上皮细胞损伤发挥修复作用。
林嘉颖[5]（2020）在《犬脂肪间充质干细胞对庆大霉素致犬急性肾损伤的修复及其机制》文中提出犬急性肾损伤（Acute Kidney Injury,AKI）是一种临床多发且死亡率较高的疾病,常规疗法对病情严重患犬效果有限。干细胞疗法是近十年来新兴的一种治疗手段,以人或鼠为模型的研究显示,间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）对包括肾脏在内的多种组织的损伤展现良好的治疗效果,而MSCs治疗犬AKI的研究甚少,其治疗效果及作用机制尚不明确。为此,本文用庆大霉素处理制备犬AKI细胞模型及动物模型,并开展了以下研究:1.犬脂肪间充质干细胞（Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells,AD-MSCs）及其条件培养基对庆大霉素致犬肾（Madin-Darby Canine Kidney,MDCK）细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响。本试验首先采用不同浓度（1、2、4、6及8 mmol/L）的硫酸庆大霉素处理MDCK细胞,确定最佳浓度进行后续试验。分组处理如下:（1）阴性对照组:未经庆大霉素处理的MDCK细胞;（2）模型组:经庆大霉素处理后的MDCK细胞;（3）AD-MSCs组:MDCK细胞经庆大霉素处理后,再与AD-MSCs共培养;（4）脂肪间充质干细胞条件培养基（Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells Conditioned Media,AD-MSC-CM）组:MDCK细胞经庆大霉素处理后,加入AD-MSC-CM培养。分别在24 h及48 h时通过cck-8法测定各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,以及荧光定量PCR法测定各组增殖（PCNA）及凋亡（Bcl-2和Bax）相关基因m RNA表达水平。结果显示:庆大霉素最佳作用剂量为5 mmol/L,它可显着抑制MDCK细胞的增殖及促进凋亡,而犬AD-MSCs及AD-MSC-CM均可逆转该效应。上述结果表明犬AD-MSCs及其条件培养基对庆大霉素诱导的MDCK细胞损伤有一定的修复作用。2.犬AD-MSCs对庆大霉素致犬AKI的治疗作用。试验分为造模和治疗两个阶段,6只健康中华田园犬（5～6月龄）随机分为模型组和治疗组,每组3只。造模阶段两组犬均按照80,000 IU/kg硫酸庆大霉素进行皮下注射,连续注射6 d。治疗阶段则治疗组犬在第7 d、10 d及13 d进行静脉输注2×106 cell/kg的AD-MSCs,模型组犬则静脉输注等量的生理盐水。造模及治疗效果的评估指标如下:血清肌酐及尿素氮、血清肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（Neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）、肾损伤分子-1（Kidney injury molecule-1,KIM-1）、尿常规、解剖学观察、组织病理学观察。结果显示:与造模前对比,庆大霉素可引起犬血清肌酐及尿素氮的大幅升高,以及炎性因子TNF-α及早期肾损伤因子NGAL和KIM-1均持续升高,尿常规异常（如酸碱度下降、葡萄糖及蛋白质增加、部分出现隐血、尿比重下降等）,并且在停药后9d犬肾皮质血流量减少,镜下可见肾小管阻塞较多,肾小管上皮细胞普遍出现变性、坏死。与模型组对比,犬AD-MSCs可改善庆大霉素导致血清肌酐及尿素氮的升高,降低血清中TNF-α水平,恢复NGAL和KIM的正常水平,并在治疗9d后明显改善肾皮质血流量,减少肾小管上皮细胞损伤,维持肾小管结构完整。上述结果表明犬AD-MSCs对庆大霉素致犬AKI有一定的治疗作用。3.犬脂肪间充质干细胞外泌体（Exosome Derived from Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells,AD-MSC-Exo）对庆大霉素致MDCK细胞损伤的修复作用及分子机制本试验首先采用低温超高速离心法分离AD-MSC-Exo,并对其进行鉴定。透视电镜检测犬AD-MSC-Exo呈卵圆形,粒径在30 nm～150 nm占97.45%,平均粒径62.31 nm。Western blot结果显示犬AD-MSC-Exo表达CD9、CD63和CD81表面标记。随后探究AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响,实验分组及处理如下:（1）阴性对照组:未经庆大霉素处理的MDCK细胞;（2）模型组:经庆大霉素处理的MDCK细胞;（3）AD-MSC-Exo组:MDCK细胞经庆大霉素处理后,再加入100μg/m L的AD-MSC-Exo培养。cck-8法测定各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,以及荧光定量PCR法测定各组细胞PCNA、Bcl-2和Bax基因的m RNA表达水平。结果显示:犬AD-MSC-Exo能显着促进受损MDCK细胞的增殖,减少细胞凋亡,与犬AD-MSCs具有类似作用,提示犬AD-MSCs可通过其分泌的Exo来发挥修复作用。为确定AD-MSC-Exo发挥作用的机制,本试验对犬AD-MSC-Exo进行高通量测序,并筛选出表达量较高的cfa-mi R-99b作进一步研究。合成cfa-mi R-99b mimic、inhibitor及Negetive Control（NC）,并将上述化合物分别转染经庆大霉素处理的MDCK细胞。结果显示:与NC结果对比,cfa-mi R-99b mimic可显着促进MDCK细胞增殖,并减少细胞凋亡,而inhibitor结果相反。生物信息学方法预测cfa-mi R-99b靶基因有17个,其中涉及的主要信号通路包括增殖相关的MAPK信号通路等。上述结果提示,cfa-mi R-99b参与了AD-MSC-Exo对庆大霉素处理MDCK细胞的促增殖、抑凋亡作用,其促增殖作用可能与MAPK信号通路有关,但仍需进一步研究。
罗冬章[6]（2020）在《脂肪间充质干细胞对猫急性肾损伤的修复作用及其机制》文中研究指明间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）是具有自我更新和多向分化能力的成体干细胞,存在于全身结缔组织中。由于MSCs具有来源广泛、免疫原性低、增殖能力强等优点,是干细胞临床应用首选的种子细胞。随着人们生活水平的提高,猫已经成为人类的重要伴侣动物,饲养量大幅增加,宠物福利也得到人们的极大重视。猫急性肾损伤（Acute kidney injury,AKI）是临床上常见的疾病,由肾脏急性缺血、肾毒性药物和尿路堵塞等因素引起。虽然近年来医疗技术得到很大发展,但AKI的治疗效果尚未得到根本改善,其死亡率逐年升高。干细胞治疗因毒副作用小、疗效显着而得到广泛认可,为许多疾病治疗提供了新途径。为筛选猫疾病治疗的种子细胞和研究MSCs对猫AKI的治疗效果及机制,本研究开展了以下实验:1.猫脂肪、骨髓、羊膜和脐带4种不同组织器官来源的MSCs生物学特性的比较研究。本实验通过全血培养法和消化法分别分离培养骨髓（Bone Marrow,BM）来源的MSCs以及脂肪（Adipose,AD）、脐带（Unbilical Cord,UC）和羊膜（Amniotic,AM）来源的MSCs,比较它们的细胞形态、生长曲线、成脂成骨分化能力以及细胞表面标志物等生物学特性。结果显示,分离获得的4种不同来源的MSCs均呈贴壁生长,细胞形态呈梭形、多棱形;均具有成脂成骨分化能力,但脂肪源和骨髓源MSCs的分化能力更强;脂肪源和骨髓源MSCs的增殖速度较快,细胞倍增时间较短,分别为30.46±1.50 h和36.51±2.50 h,而羊膜与脐带源的MSCs增殖能力较差,细胞倍增时间较长,分别为55.85±3.34 h和58.06±2.68 h;4种细胞中脂肪来源MSCs的增长活性最好,细胞传至第9代的时候依然保持良好的增殖活性,提示AD-MSCs的临床应用可能较好,可作为治疗种子细胞;4种MSCs细胞表面均高表达CD105、CD90和CD44等标志物,低表达CD34,符合MSCs的细胞表面特征。2.AD-MSCs及其条件培养基对GM致损的CRFK的增殖和凋亡的调控作用。本实验先研究了庆大霉素（Gentamicin,GM）对CRFK（Crandell Rees Feline Kidney,CRFK）的毒性作用,再通过CCK-8法、Annexin V流式检测法和荧光定量PCR法分别测定脂肪源间充质干细胞（Adipose Mesenchymal Stem Cells,AD-MSCs）及其条件培养基（Adipose Mesenchymal Stem Cells Conditioned Medium,AD-MSCs-CM）对GM致损后CRFK的增殖和凋亡及其相关基因表达的影响。结果表明,不同浓度的GM作用于肾细胞12 h后,各组的细胞活性显着低于正常组,且随着GM致损时间和浓度的增加,细胞活性越低,具有明显的时间-剂量-效应关系;AD-MSCs和AD-MSCs-CM组的CRFK细胞活性显着高于GM组,细胞凋亡率显着低于GM组;Q-PCR检测结果显示,与GM组相比,AD-MSCs组的CCND1和PCNA基因表达显着增加,AD-MSCs-CM组的有增加趋势但没有显着性;AD-MSCs组的Bcl-2/Bax比值显着高于其它组,其他组之间无显着性差异。结果提示,AD-MSCs及AD-MSCs-CM通过增加CRFK的细胞增殖活性、减少细胞凋亡来促进GM损伤的CRFK修复。3.AD-MSCs治疗猫AKI的效果观察。本实验将4-5月龄、体重约1.31 kg的18只家猫,随机分为空白对照组、模型组和治疗组,每组6只猫。治疗组和模型组每天注射2次、剂量为200 mg/kg的GM,空白组注射等量的生理盐水,建立AKI模型;治疗组静脉输注AD-MSCs,细胞数量为2×106个/kg,每隔5d注射1次,共注射5次;空白对照组和模型组静脉滴注等量生理盐水。分别在输注后的第7、14、21、36 d采集血样和肾组织,通过病理组织学、血清学和免疫组化等方法检测相关指标。结果发现,治疗组的平均存活时间比模型组长,死亡率比模型组低。在第7 d时,治疗组和模型组血液肌酐高于或显着高于对照组,而模型组的显着高于治疗组;模型组的血液尿素氮高于治疗组和对照组的,但治疗组与对照组之间无差异显着性;治疗组和模型组的血磷与对照组相比无差异显着性;治疗组的血液肌酐和尿素氮含量均显着低于模型组,而血液磷含量无差异显着性。第14 d时,模型组的血肌酐、尿素氮和磷值均高于治疗组的,且尿素氮值有差异显着性。第21 d和36 d时,模型组血肌酐、尿素氮和磷值依然高于治疗组和对照组。组织病理学结果显示:造模后第14天,模型组大部分肾小管坏死脱落、基底膜暴露,而治疗组大部分肾小管上皮细胞肿胀,只有少数肾小管坏死脱落。Ki67免疫组化结果显示,模型组的肾小管和肾间质几乎无染成棕色的细胞,而治疗组只有少数肾小管上皮细胞被染成棕色。第21 d时,模型组部分肾小管坏死脱落、基底膜暴露、间质增厚,而治疗组大部分肾小管细胞排列整齐、可见刷状缘结构,只有少数肾小管上皮细胞肿胀、坏死脱落;Ki67染色显示,模型组的多数肾间质细胞被染成棕色,而治疗组的肾小管上皮细胞被染成棕色。第36 d时,模型组依然可见上皮细胞肿胀、脱落以及肾小球系膜和间质增生,而治疗组大部分肾小管细胞排列整齐可见刷状缘结构;Ki67染色显示,模型组的大量肾间质细胞被染成棕色,治疗组的多数肾小管上皮细胞被染成棕色;冰冻切片观察可发现,PKH26标记的MSCs可归巢到肾组织,而模型组和空白组则没有。以上结果提示:AD-MSCs移植治疗能显着降低GM诱导的AKI猫的血液肌酐、尿素氮和磷含量;PKH26标记的MSCs可归巢到肾组织,减少肾小管上皮细胞肿胀、坏死、脱落以及肾间质增生,促进肾小管上皮细胞的增殖。
张隆业[7]（2019）在《胰激肽原酶对他克莫司诱导肾损伤的保护作用及其机制》文中认为目的探讨胰激肽原酶（pancreatic kallikrein,PK）对他克莫司（tacrolimus,TAC）诱导的大鼠肾脏损伤的保护作用及其机制。方法体内实验:48只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组（每组12只）,正常对照组（VH）:橄榄油lmL/kg/day皮下注射和生理盐水2mL/kg/day腹腔注射;VH+PK组:橄榄油 lmL/kg/day 皮下注射和 PK7.2u/kg/day 腹腔注射;TAC 组:TAC1.5mg/kg/day 皮下注射和生理盐水2mL/kg/day腹腔注射;TAC+PK组:TAC1.5mg/kg/day皮下注射和PK7.2u/kg/day腹腔注射,各组给药共4周。4周后收集各组大鼠24小时尿液,使用全自动尿液分析仪检测24h尿蛋白（Urinary protein,UPRO）;右侧颈内静脉采血,使用全自动生化分析仪检测血肌酐（Serumcreatinine,Scr）及血尿素氮（Bloodureanitrogen,BUN）及TAC血药浓度;利用腹腔内葡萄糖耐受试验（Intraperitoneal Glucose tolerance test,IPGTT）检测大鼠 Omin、30min、60min、90min、120min血糖并根据各时间点血糖值计算葡萄糖曲线下面积（Area under the curve of glucose,AUCg）;使用ELISA法测定各组大鼠血清8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG）的表达和尿 8-OHdG 排泄率。采集肾组织标本,常规石蜡包埋和切片,Masson染色法观察肾间质纤维化程度（Tubulointerstitial fibrosis,TIF）;PAS染色观察肾小球病变;使用电子显微镜观察肾组织的超微结构变化;使用TUNEL染色法观察肾组织中的凋亡细胞;利用免疫组化法检测肾组织中肾母细胞瘤蛋白抗体（Wilms Tumorprotein 1,WT-1）、骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）、外胚层发育不良抗体（Ectodermal Dysplasial,ED-1）和锰超氧化物歧化酶（Manganese-containingsu2 peroxidedismutase,MnSOD）。使用免疫印迹法检测肾组织中转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）、MnSOD、白介素 6（Interleukin-6,IL-6）、血红素氧合酶 1（Hemeoxygenase-1,HO-1）、NADPH 氧化酶 2/4（NADPHOxidase2/4,NOX2/4）、自噬相关因子轻链蛋白 3B（Light chainprotein3B,LC3B）、P62、Beclin、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bc12-associatedXBax）和 B淋巴细胞瘤-2（B-celllymphoma2,Bcl-2）的表达。体外实验:体外培养HK-2细胞株,将HK-2细胞分组为对照（Control,CON）组、PK（6pg/mL）组、TAC（50ug/mL）组和 TAC（50ug/mL）+PK（6pg/mL）组每组分别处理时间24h。使用细胞增殖-毒性检测法（CCK-8）测定各组细胞活力;二氯二氢荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）荧光结合流式细胞法检测细胞内活性氧（ROS）的产生;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、LC3B和Beclin的表达。结果体内实验1.与VH组相比,TAC组大鼠的体重明显降低,24h尿量、24h尿蛋白定量、血肌酐和血尿素氮均升高（均P<0.05）,与TAC组相比,TAC+PK组大鼠体重增加,24小时尿蛋白定量、血肌酐和血尿素氮均降低（均P<0.05）。2.与VH组相比,TAC组糖耐量明显异常;与TAC组相比,TAC+PK组糖耐量异常改善（均P<0.05）。3.与VH组相比,TAC组肾小管损伤明显,TIF加重;TAC+PK治疗组肾小管损伤减轻,TIF减轻,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。4.与VH组相比,TAC组肾小球系膜区面积扩大,肾组织中WT-1表达降低;与TAC组相比,TAC+PK组小球系膜区面积缩小,肾组织中WT-1表达升高,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。5.与VH组相比,电镜观察TAC组肾小管及肾小球损伤明显,而与TAC组比较,TAC+PK组肾组织超微结构改变有不同程度改善。6.与VH组相比,TAC组的TGF-β1表达明显升高。与TAC组相比,TAC+PK组TGF-β1表达降低,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。7.与VH组相比,TAC组的血清和尿8-OHdG含量增加、促氧化因子（NOX2、NOX4）表达增加,抗氧化因子（MnSOD）表达降低;与TAC组相比,血清、尿氧化应激产物8-OHdG降低、TAC+PK组促炎因子（NOX-2、NOX4）表达降低,抗氧化因子（MnSOD）表达增加,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。8.与VH组相比,TAC组促炎因子（ED-1OPNIL-6）表达增加,抗炎因子HO-1表达降低;与TAC组相比,TAC+PK组促炎因子（ED-1OPNIL-6）表达降低,抗炎因子HO-1表达增加,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。9.与VH组相比,TAC组的自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、P62、Beclin的表达增加;与TAC组相比,TAC+PK组LC3B-Ⅱ、P62、Beclin的表达降低,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。10.与VH组相比,TAC组的TUNEL阳性细胞数增加,Bcl-2/Bax 比值降低;与TAC组相比,TAC+PK组TUNEL 阳性细胞数降低,Bcl-2/Bax 比值升高,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。体外实验1.与CON组相比,TAC组HK-2细胞活力降低;与TAC组相比,TAC+PK组HK-2细胞活力增加,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。2.与CON组相比,TAC组ROS表达增加;与TAC组相比,TAC+PK组ROS表达降低;差异均具有统计学意义（均P<0.05）。3.与CON组相比,TAC组细胞自噬增加,LC3B-Ⅱ、Beclin表达增加;与TAC组相比,TAC+PK组LC3B-Ⅱ、Beclin表达降低,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。4.与CON组相比,TAC组细胞凋亡增加,Bcl-2/Bax 比值降低;与TAC组相比,TAC+PK组Bcl-2/Bax 比值升高,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。结论在体内及体外实验中胰激肽原酶对他克莫司诱导肾小管间质纤维化、肾小球损伤具有保护作用,其机制与胰激肽原酶抑制TGF-β1表达、抗氧化应激、抗炎、调节自噬、抗凋亡以及降低血糖有关。
孙桃桃[8]（2019）在《黄精多糖对庆大霉素诱导大鼠肾损伤的保护作用研究》文中指出根据前期研究结果,中药黄精对小鼠肾损伤有较好的保护作用。为探讨其发挥作用的有效部位,本试验以黄精的主要活性成分黄精多糖为试验药物,对其保护庆大霉素诱导的大鼠肾损伤作用进行研究。试验将60只SD大鼠随机分成6组,即空白组,模型组,黄精多糖低、中、高剂量组（0.25、0.5、1 g/kg）,金匮肾气丸组（0.6g/kg）。空白组大鼠肌肉注射生理盐水,其余各组大鼠均肌注庆大霉素注射液（100 mg/kg）,注射6h后分别灌服不同剂量黄精多糖、金匮肾气丸和蒸馏水,连续7 d。试验结束时,采集大鼠血液和肾组织样品,生物化学法检测血清CRE和UREA水平,HE染色法观察肾脏组织病理学变化,qRT-PCR 法检测’肾组织中 NGAL、KIM-1、IL-1β、IL-6、TNF-α、p38MAPK 基因表达,Western Blot 法检测 p38 MAPK、p-p38 MAPK、p-ATF2 蛋白的表达。结果显示:（1）体重与肾脏系数变化:与空白组相比,模型组大鼠体重显着降低（P<0.05）、肾脏系数显着升高（P<0.05）。与模型组相比,黄精多糖中剂量组大鼠体重显着升高（P<0.05）,黄精多糖低、高剂量组和金匮肾气丸组体重升高,但差异不显着（P>0.05）;3个黄精多糖剂量组和金匮肾气丸组肾脏系数均显着降低（P<0.05）。黄精多糖中剂量组肾脏系数显着低于金匮肾气丸组（P<0.05）。（2）肾功能血液生化指标CRE和UREA:与空白组相比,模型组大鼠CRE和UREA水平显着升高（P<0.05）;与模型组相比,3个黄精多糖剂量组和金匮肾气丸组大鼠CRE和UREA水平均显着降低（P<0.05）;黄精多糖中剂量组CRE和UREA水平显着低于金匮肾气丸组（P<0.05）。（3）肾脏组织病理学变化:模型组大鼠肾小管上皮细胞肿胀、变性,呈空泡状,大量炎性细胞浸润,部分结构消失,肾小球变性、坏死。经黄精多糖和金匮肾气丸灌胃后,肾小管上皮细胞轻度肿胀,坏死程度明显减轻,少量炎性细胞浸润和肾小球变性、坏死程度明显改善。（4）肾组织NGAL和KIM-1基因的表达:与空白组相比,模型组大鼠肾组织NGAL和KIM-1基因表达均显着升高（P<0.05）;与模型组相比,3个黄精多糖剂量组和金匮肾气丸组NGAL和KIM-1基因表达均显着降低（P<0.05）:黄精多糖中剂量组NGAL和KIM-1基因表达量显着低于金匮肾气丸组（P<0.05）。（5）肾组织IL-1β、IL-6、TNF-α和p38MAPK基因表达:与空白组相比,模型组大鼠肾组织IL-1β、IL-6、TNF-α和p38 MAPK基因表达均显着升高（P<0.05）:与模型组相比,3个黄精多糖剂量组和金匮肾气丸组IL-1β、IL-6、TNF-α、p38MAPK基因表达均显着降低（P<0.05）;黄精多糖中剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α和p38 MAPK基因表达量显着低于金匮肾气丸组（P<0.05）。（6）肾组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK、p-ATF2蛋白的表达:Western Blot结果显示,与空白组相比,模型组大鼠p38MAPK、p-p38MAPK、p-ATF2的蛋白表达升高;与模型组相比,3个黄精多糖剂量组和金匮肾气丸组p38MAPK、p-p38MAPK、p-ATF2的蛋白表达均有不同程度降低。综上所述,黄精多糖可以显着降低庆大霉素诱导的肾损伤大鼠血清中CRE和UREA水平,减轻肾组织病理结构变化和降低肾组织中NGAL和KIM-1基因的表达,抑制p38MAPK/ATF2信号通路和TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子的产生,表明黄精多糖具有较好的抗肾损伤作用。该研究可为兽医临床上动物肾损伤的防治提供参考。
孙航[9]（2019）在《花鹿茸总蛋白减轻庆大霉素肾毒性的研究》文中研究表明鹿茸入药历史悠久,是治疗肾阳虚的常用药材。药典记载,鹿茸具有壮肾阳、强筋骨及益精血等功效。药理实验证明,鹿茸水提物对铂类药物诱导的肾毒性具有一定的改善作用,但药物的肾毒性机制及作用途径不同,且鹿茸对GM肾毒性的影响尚未见报道。庆大霉素（GM）为氨基糖苷类抗生素针对革兰氏阴性菌具有良好的药效,GM因价格优廉、抗菌谱广等特点,在临床上曾被广泛应用,但因其肾毒性而在临床应用上受到限制。因此,寻找预防或减轻GM肾毒性的天然辅助性药物已成为研究热点。本文探讨花鹿茸水提物中对GM诱导的肾损伤起保护作用的有效成分及其保护机制。采用超声波辅助溶剂法和水提醇沉法分别提取梅花鹿二杠茸中总蛋白（SDAPR）和总多糖（SDAPO）成分,通过Braford法和苯酚硫酸法分别对其进行纯度测定。实验结果SDAPR的纯度为92.60%,多糖含量≤5.00%;SDAPO纯度为91.30%。研究花鹿茸中水溶性成分减轻GM诱导的人胚肾293（HEK293）细胞毒性的影响。建立体外GM诱导HEK293细胞毒性模型。采用MTT法进行GM对HEK293细胞毒性测定、SDAPR和SDAPO对HEK293细胞增殖测定、SDAPR和SDAPO减轻GM诱导细胞损伤的活性筛选。使用生化试剂盒分别测定HEK293细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）含量、细胞裂解液中谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。同时,运用光学显微镜观察细胞形态变化。结果表明,GM显着抑制HEK293细胞活力且呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)为3.00 mg·mL-1（P<0.01）,SDAPR(0.50-4.50 mg·mL-1)对HEK293细胞有显着的细胞增殖作用（P<0.01）且无细胞毒性,然而SDAPO(0.50-4.50 mg·mL-1)对HEK293细胞无显着增殖作用（P>0.05）。SDAPR(1.00,2.00,4.00 mg·mL-1)预给药改善GM致HEK293细胞活力下降现象,由细胞死亡量较多,漂浮且形态皱缩转变为细胞形态逐渐恢复正常,细胞呈正常的梭型形态且细胞数量明显增多,同时SDAPR预给药还缓解GM诱导的HEK293细胞中GSH含量和SOD活性的降低,及MDA含量和LDH释放量的升高（P<0.01）。SDAPR能够减轻GM诱导的HEK293细胞毒性,其机制可能与促进细胞增殖和减轻氧化应激反应相关。研究SDAPR拮抗GM诱导HEK293细胞凋亡。建立体外GM诱导细胞损伤及凋亡模型,研究SDAPR对细胞凋亡的影响。采用ELISA法测定早期急性肾损伤指标,如:中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）,胱抑素-C（Cys-C）和肾损伤分子1（KIM-1）水平。使用JC-10线粒体膜电位试剂盒测定HEK293细胞中线粒体膜电位ΔΨm（MMP）。通过Hoechst33258荧光染色、流式细胞术及Western蛋白印迹分析的技术分别检测HEK293细胞的核形态、细胞凋亡率和细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况。结果显示,与正常对照组相比,GM组细胞中NGAL、Cys-C和KIM-1含量及促凋亡蛋白Bax表达和细胞凋亡率显着上升（P<0.05,P<0.01）,且细胞核收缩、染色质浓缩呈现凋亡小体,细胞中线粒体膜电位ΔΨm和抗凋亡蛋白Bcl-2表达显着下降（P<0.01）;经SDAPR给药后,细胞中NGAL、Cys-C和KIM-1含量及促凋亡蛋白Bax表达和细胞凋亡率显着下降（P<0.05,P<0.01）,且细胞核蓝色荧光强度降低,细胞核碎片和凋亡小体的数量明显减少,线粒体膜电位ΔΨm和抗凋亡蛋白Bcl-2表达显着升高（P<0.01）。SDAPR能够保护HEK293细胞免受GM所诱导的细胞损伤,这可能与花鹿茸总蛋白拮抗细胞凋亡反应有关。研究SDAPR对GM诱导的小鼠肾毒性的影响。建立体内GM诱导ICR小鼠肾毒性模型,记录小鼠体质量和肾质量,计算肾指数;以生化试剂盒方法分别检测小鼠血清中血尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）的水平,肾组织中过氧化氢酶（CAT）和SOD活性、MDA和GSH含量;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）水平;H&E染色观察肾组织病理变化。结果表明,SDAPR（50,100,200 mg/kg）显着抑制GM（100 mg/kg）诱导的小鼠肾指数、BUN、Cr、MDA、TNF-α和IL-6水平的升高（P<0.05,P<0.01）,以及SOD,CAT和GSH水平的降低（P<0.05,P<0.01）,并改善肾组织病理变化。SDAPR可有效减轻GM诱导的小鼠肾损伤,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。结合体内外实验结果可知,SDAPR可有效减轻GM诱导的HEK293细胞毒性,保护HEK293细胞免受GM所诱导的细胞损伤及凋亡,其机制与促进细胞增殖、抑制氧化应激反应及拮抗细胞凋亡反应有关。同时,SDAPR还可减轻GM诱导的小鼠肾损伤,其机制与抑制氧化应激和炎症反应有关。系统研究SDAPR对氨基糖苷药物-GM诱导药物性肾损伤的影响,为传统中药花鹿茸的补肾作用机理研究提供基础理论依据。
周俊珂[10]（2019）在《Ox-LDL对造影剂诱导肾小管上皮细胞损伤的影响》文中指出目的:1、探讨氧化低密度脂蛋白（Oxidized Low Density Lipoprotein,ox-LDL）对造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响。2、建立ox-LDL加重造影剂所致急性肾损伤（Contrast-induced Acute Kidney Injury,CI-AKI）的体外模型。3、在ox-LDL加重CI-AKI体外模型的基础上探讨线粒体损伤、线粒体自噬、氧化应激在ox-LDL加重造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡中作用。方法:1、本实验采用大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）作为体外培养的研究对象。2、不同浓度（0、25、50mg/mL）的ox-LDL和碘海醇（100 mgI/mL）共同培养NRK-52E细胞4小时,流式细胞仪检测各组NRK-52E细胞的凋亡情况。探索不同浓度的ox-LDL对造影剂诱导肾小管上皮细胞的影响,并摸索出ox-LDL加重CI-AKI体外模型的最佳ox-LDL浓度。3、在上述实验中得到的最佳ox-LDL浓度进行后续实验。将NRK-52E细胞分为4组:对照组（control组）、碘海醇组（Iohexol组）、ox-LDL组、碘海醇和ox-LDL组;（1）对照组:加入等体积无血清培养基,（2）碘海醇组:加入100 mgI/mL碘海醇,（3）ox-LDL组:加入50mg/mL ox-LDL,（4）碘海醇和ox-LDL组:加入50mg/mL ox-LDL和100 mgI/mL碘海醇。采用流式细胞仪检测NRK-52E细胞的凋亡和活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）的表达,Western-blot检测胞浆及线粒体中细胞色素c（Cytochrome c,Cyt c）的表达,JC-1法检测线粒体膜电位（Mitochondrial Membrane Potential,MMP）,探讨ox-LDL加重造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡的分子机制;免疫荧光双染法检测Lyso-Tracker Red标记的溶酶体与Mito-Tracker Green标记的线粒体共表达情况,初步探讨线粒体自噬是否参与ox-LDL加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡。结果:1、与对照组相比,加入不同浓度的ox-LDL和碘海醇共同培养NRK-52E细胞,随着ox-LDL浓度的增加,细胞的凋亡率也随之增加（P<0.05）,当ox-LDL浓度为50mg/mL时,细胞凋亡率最高（P<0.05）。2、与对照组相比,碘海醇组、ox-LDL组、碘海醇和ox-LDL组的细胞凋亡率均增加（P<0.05）,与碘海醇组相比,碘海醇和ox-LDL（50mg/mL）组的细胞凋亡率增加更为显着（P<0.05）。3、与对照组相比,碘海醇组、ox-LDL组、碘海醇和ox-LDL组的ROS的表达均增加（P<0.05）,与碘海醇组相比,ox-LDL和碘海醇组的ROS的表达更加显着（P<0.05）。4、与对照组相比,碘海醇组、ox-LDL组、碘海醇和ox-LDL组的胞浆/线粒体Cyt c表达均增加（P<0.05）,与碘海醇组相比,碘海醇和ox-LDL组的胞浆/线粒体Cyt c表达明显增加（P<0.05）。5、与对照组相比,碘海醇组、ox-LDL组、碘海醇和ox-LDL组的MMP均下降（P<0.05）,与碘海醇组相比,碘海醇和ox-LDL组的MMP下降更加明显（P<0.05）。6、细胞凋亡率与ROS的表达呈正相关（r=0.9167,P<0.01）;细胞凋亡率与胞浆/线粒体Cyt c表达呈正相关（r=0.8566,P<0.01）,与MMP呈负相关（r=0.8276,P<0.01）。7、与对照组相比,碘海醇组中Lyso-Tracker Red标记的溶酶体与Mito-Tracker Green标记的线粒体共定位表达增多;与碘海醇组相比,碘海醇和ox-LDL组中Lyso-Tracker Red标记的溶酶体与Mito-Tracker Green标记的线粒体共定位表达减少。结论:1、Ox-LDL加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡。2、成功建立ox-LDL加重CI-AKI的体外模型。3、线粒体损伤、氧化应激是ox-LDL加重造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡的机制之一。4、线粒体自噬可能参与ox-LDL加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡。
二、庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达（论文提纲范文）
（1）基于中医象思维探讨肾衰饮干预慢性肾功能衰竭大鼠的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 观察肾衰饮对CRF大鼠抗炎、抗凋亡的作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 基于TLR4/MyD88/NF-κB通路探讨肾衰饮对CRF大鼠抗炎机制的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 肾衰饮对CRF大鼠肾脏细胞凋亡的调控机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文四 探讨肾衰饮调控CRF大鼠PI3K/Akt通路的作用机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 从炎症及细胞凋亡角度探讨CRF的发病机制及中药防治CRF的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（2）电针三焦经腧穴联合金匮肾气丸干预庆大霉素诱发大鼠耳、肾毒性的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 “肾与三焦相通”的理论源流及研究概况 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（3）肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治慢性肾脏病肾纤维化研究进展 |
| 1. 病名 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 临床治疗 |
| 4. 实验研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 肾康注射液治疗肾脏疾病研究概述 |
| 1. 药物基本情况 |
| 2. 临床疗效研究 |
| 3. 基础药理机制研究 |
| 4.发展前景 |
| 参考文献 |
| 综述三 血管生成在肾纤维化发生发展中作用的研究进展 |
| 1. 血管生成发生发展 |
| 2. 肾纤维化发生发展 |
| 3. 血管生成障碍与肾纤维化密切相关 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 肾康注射液对UUO小鼠肾纤维化和血管生成的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 肾康注射液对HUVEC血管生成和VEGF/VEGFR-2/eNOS的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要成果 |
（4）犬脂肪间充质干细胞及其外泌体修复庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤（论文提纲范文）
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 材料 |
| 1.3.1 实验细胞株 |
| 1.3.2 实验试剂及耗材 |
| 1.3.3 实验仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 AD-MSC-CM制备 |
| 1.4.2 犬AD-MSCs及AD-MSC-CM对受损MDCK细胞增殖的影响 |
| 1.4.3 犬AD-MSCs及AD-MSC-CM对受损MDCK细胞凋亡的影响 |
| 1.4.4 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞增殖的影响 |
| 1.4.5 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞凋亡的影响 |
| 1.4.6 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞PCNA、Bcl-2和Bax m RNA表达水平的影响 |
| 1.5 主要观察指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 犬AD-MSCs及AD-MSC-CM对受损MDCK细胞增殖的影响 |
| 2.2 犬AD-MSCs及其AD-MSC-CM对受损MDCK细胞凋亡的影响 |
| 2.3 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞增殖的影响 |
| 2.4 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞凋亡的影响 |
| 2.5 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞PCNA、Bcl-2和Bax m RNA表达水平的影响 |
| 3 讨论Discussion |
（5）犬脂肪间充质干细胞对庆大霉素致犬急性肾损伤的修复及其机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 本文常用英文名词缩写 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 犬急性肾损伤 |
| 1.1.1 犬急性肾损伤的定义及分期 |
| 1.1.2 犬急性肾损伤的分类 |
| 1.1.3 犬急性肾损伤诊断 |
| 1.1.4 犬急性肾损伤常规治疗方法 |
| 1.2 间充质干细胞 |
| 1.2.1 间充质干细胞的生物学特性 |
| 1.2.2 间充质干细胞修复组织损伤的机制 |
| 1.2.3 间充质干细胞促进急性肾损伤修复的研究进展 |
| 1.3 外泌体 |
| 1.3.1 外泌体的生物学特性 |
| 1.3.2 外泌体的成分及功能 |
| 1.3.3 外泌体的分离方法 |
| 1.3.4 外泌体的鉴定方法 |
| 1.3.5 间充质干细胞外泌体在急性肾损伤治疗中的研究进展 |
| 第二章 犬AD-MSCs及其条件培养基对庆大霉素致MDCK细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 MDCK细胞形态学观察 |
| 2.3.2 犬AD-MSCs形态学观察 |
| 2.3.3 不同浓度庆大霉素对MDCK细胞增殖的影响 |
| 2.3.4 犬AD-MSCs及其条件培养基对受损MDCK细胞增殖的影响 |
| 2.3.5 犬AD-MSCs及其条件培养基对受损MDCK细胞凋亡的影响 |
| 2.3.6 RT-PCR检测各组MDCK细胞PCNA、Bcl-2和Bax基因的mRNA表达 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 犬 AD-MSCs对庆大霉素致犬AKI的治疗作用 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 .材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 临床症状 |
| 3.3.2 犬血清肌酐及尿素氮检测结果 |
| 3.3.3 犬血清TNF-α、NGAL、KIM-1检测结果 |
| 3.3.4 犬尿常规检查结果 |
| 3.3.5 犬肾脏解剖结果 |
| 3.3.6 犬肾脏切片结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 犬AD-MSC-Exo对庆大霉素致MDCK细胞损伤的修复作用及分子机制 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要试剂与耗材 |
| 4.2.2 主要实验仪器 |
| 4.2.3 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 犬AD-MSC-Exo鉴定结果 |
| 4.3.2 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞增殖的影响 |
| 4.3.3 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞凋亡的影响 |
| 4.3.4 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞PCNA、Bcl-2和Baxm RNA表达水平的影响 |
| 4.3.5 cfa-miR-99b转染MDCK细胞及转染效果验证 |
| 4.3.6 cfa-miR-99b转染对受损MDCK细胞增殖的影响 |
| 4.3.7 cfa-miR-99b转染对受损MDCK细胞凋亡的影响 |
| 4.3.8 cfa-miR-99b靶基因及信号通路预测结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他成果 |
| 附录 |
| 各基因qPCR的扩增效率曲线及溶解曲线 |
| 犬AD-MSC-Exo microRNA测序结果(Top50) |
| miRNA靶基因预测及通路分析网址及截图 |
| 实验动物伦理审查申请表 |
| 实验动物伦理审查意见表 |
（6）脂肪间充质干细胞对猫急性肾损伤的修复作用及其机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 本文常用英文缩写词 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 间充质干细胞的研究概况 |
| 1.1.1 干细胞及其分类 |
| 1.1.2 MSCs |
| 1.1.3 猫的MSCs |
| 1.1.4 MSCs在宠物疾病治疗上的应用 |
| 1.1.5 MSCs应用展望 |
| 1.2 急性肾损伤的研究概况 |
| 1.2.1 AKI的病理过程 |
| 1.2.2 AKI的分类与病因 |
| 1.2.3 AKI的治疗方法 |
| 1.2.4 AKI干细胞治疗研究进展 |
| 1.2.5 猫肾病的干细胞治疗研究进展 |
| 第二章 猫4种不同来源间充质干细胞的生物学特性比较研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 细胞形态学观察 |
| 2.3.2 生长曲线 |
| 2.3.3 MSCs表面标记鉴定 |
| 2.3.4 成脂成骨分化鉴定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 AD-MSCs及其条件培养基对GM致损的CRFK的增殖和凋亡的调控作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 不同浓度的GM在不同致损时间对CRFK活性的影响 |
| 3.3.2 AD-MSCs及 AD-MSCs-CM对CRFK增殖活性的影响 |
| 3.3.3 AD-MSCs及其AD-MSCs-CM对CRFK细胞凋亡率的影响 |
| 3.3.4 AD-MSCs及其AD-MSCs-CM对GM致损的CRFK增殖基因ccnd1和pcna表达的影响 |
| 3.3.5 AD-MSCs及其AD-MSCs-CM对GM致损的CRFK凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响 |
| 3.4 讨论分析 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 AD-MSCs对猫AKI的治疗效果观察 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 临床观察 |
| 4.3.2 各组猫的体重变化 |
| 4.3.3 血液中肌酐、尿素氮和无机磷等指标的检查结果 |
| 4.3.4 各组猫的存活率与存活时间 |
| 4.3.5 病理解剖观察 |
| 4.3.6 病理组织学观察 |
| 4.3.7 PKH26标记的MSCs在肾的分布结果 |
| 4.3.8 Ki67免疫组化检测结果 |
| 4.4 讨论分析 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他成果 |
| 附件 |
（7）胰激肽原酶对他克莫司诱导肾损伤的保护作用及其机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 胰激肽原酶对他克莫司诱导肾脏损伤的保护作用 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 主要实验仪器及耗材 |
| 1.3 标本采集 |
| 1.4 实验室检测 |
| 1.5 肾脏病理学检查 |
| 1.6 免疫组织化学染色 |
| 1.7 统计学处理 |
| 第二章 结果 |
| 2.1 各组大鼠基本数据及实验室检测结果 |
| 2.2 各组大鼠IPGTT和AUCg的检测结果 |
| 2.3 PK对TAC诱导的肾小管病变的影响 |
| 2.4 PK对TAC诱导的肾小球损伤的影响 |
| 2.5 肾脏超微结构的改变 |
| 第三章 讨论 |
| 3.1 PK对TAC诱导的肾损伤的保护作用 |
| 3.2 PK对于TAC诱导的高血糖的降糖作用 |
| 第四章 小结 |
| 第二部分 胰激肽原酶对他克莫司诱导的肾脏损伤的保护机制 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.1 实验动物、分组标本采集: |
| 1.2 主要实验耗材和仪器 |
| 1.3 ELISA法检测血及尿8-OHdG |
| 1.4 免疫印迹法 |
| 1.5 免疫组织化学染色法 |
| 1.6 TUNEL染色 |
| 1.7 体外实验方法 |
| 1.8 统计学处理 |
| 第二章 结果 |
| 2.1 体内实验结果 |
| 2.2 体外实验结果 |
| 第三章 讨论 |
| 3.1 PK与TAC诱导的TGF-β1高表达 |
| 3.2 PK与TAC诱导的氧化应激 |
| 3.3 PK与TAC诱导的炎症反应 |
| 3.4 PK与TAC诱导的自噬清除障碍 |
| 3.5 PK与TAC诱导的细胞凋亡 |
| 3.6 PK与高血糖诱导的肾损伤 |
| 3.7 PK与TAC诱导的HK-2损伤 |
| 3.8 TAC诱导肾损伤中各种致病因素的相关性 |
| 第四章 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（8）黄精多糖对庆大霉素诱导大鼠肾损伤的保护作用研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要缩略词 |
| 文献综述 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 动物 |
| 1.1.2 主要药品与试剂 |
| 1.1.3 主要设备与仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 黄精多糖溶液的制备 |
| 1.2.2 黄精多糖含量的测定 |
| 1.2.3 动物分组和处理 |
| 1.2.4 与肾功能相关的血液生化指标检测 |
| 1.2.5 肾脏组织病理学观察 |
| 1.2.6 肾组织NGAL、KIM-1、IL-1β、IL-6、TNF-α和p38 MAPK基因表达 |
| 1.2.7 肾组织p38 MAPK、p-p38 MAPK、p-ATF-2蛋白的表达 |
| 1.2.8 统计学分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 黄精多糖含量 |
| 2.2 体重变化 |
| 2.3 肾脏系数变化 |
| 2.4 肾功能血液生化指标 |
| 2.5 一般观察和肾组织病理学变化 |
| 2.6 肾组织NGAL、KIM-1、IL-1β、IL-6、TNF-α和p38 MAPK mRNA表达量 |
| 2.6.1 肾组织中NGAL和KIM-1 mRNA的表达量检测结果 |
| 2.6.2 肾组织中炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达量检测结果 |
| 2.6.3 肾组织中p38 MAPK mRNA的表达量检测结果 |
| 2.7 肾脏组织p38 MAPK、p-p38 MAPK、p-ATF-2蛋白的表达情况 |
| 3 讨论 |
| 3.1 庆大霉素致肾损伤作用 |
| 3.2 金匮肾气丸作为阳性对照药物的依据 |
| 3.3 黄精多糖对急性肾毒性早期生物标志物KIM-1和NGAL的影响 |
| 3.4 黄精多糖对炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的影响 |
| 3.5 黄精多糖对p38 MAPK/ATF2信号通路的影响 |
| 3.6 有待进一步研究的问题 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（9）花鹿茸总蛋白减轻庆大霉素肾毒性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 中药有效成分减轻GM肾毒性研究概况 |
| 1.1 GM诱导肾毒性机制研究 |
| 1.2 抑制GM肾毒性的药物及途径 |
| 1.3 鹿茸对肾脏疾病的现代药理研究 |
| 1.4 展望 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 花鹿茸总蛋白(SDAPR)及总多糖(SDAPO)的制备 |
| 1.1 实验用品 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 结果与讨论 |
| 第二章 SDAPR和 SDAPO减轻GM诱导的HEK293 细胞毒性的研究 |
| 2.1 实验用品 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 SDAPR拮抗GM诱导HEK293 细胞凋亡研究 |
| 3.1 实验用品 |
| 3.2 实验内容 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 SDAPR减轻GM诱导的小鼠肾毒性的研究 |
| 4.1 实验用品 |
| 4.2 实验内容 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者介绍 |
| 致谢 |
（10）Ox-LDL对造影剂诱导肾小管上皮细胞损伤的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、Ox-LDL对造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.1.1 细胞系及来源 |
| 1.1.2 实验试剂及仪器 |
| 1.1.3 大鼠的肾小管上皮细胞的处理 |
| 1.1.4 流式细胞仪检测NRK-52E细胞凋亡 |
| 1.1.5 ROS的检测 |
| 1.1.6 Western blotting检测 |
| 1.1.7 线粒体膜电位检测 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 Ox-LDL对造影剂诱导的NRK-52E细胞凋亡的影响 |
| 1.2.2 Ox-LDL对造影剂诱导ROS表达的影响 |
| 1.2.3 Ox-LDL对造影剂诱导线粒体内Cytc释放的影响 |
| 1.2.4 Ox-LDL对造影剂诱导MMP下降的影响 |
| 1.2.5 NRK-52E细胞凋亡与ROS、线粒体损伤相关性分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 Ox-LDL对造影剂诱导NRK-52E细胞凋亡的影响 |
| 1.3.2 ROS在 ox-LDL加重造影剂诱导NRK-52E细胞凋亡的作用 |
| 1.3.3 线粒体损伤在ox-LDL加重造影剂诱导NRK-52E细胞凋亡中的作用 |
| 1.3.4 NRK-52E细胞凋亡与ROS、线粒体损伤相关性分析 |
| 1.4 小结 |
| 二、初步探讨线粒体自噬是否参与ox-LDL加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 细胞及来源 |
| 2.1.2 实验试剂和仪材 |
| 2.1.3 NRK-52E细胞培养 |
| 2.1.4 NRK-52E细胞处理及实验分组 |
| 2.1.5 免疫荧光双染检测 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 线粒体自噬在ox-LDL加重造影剂诱导NRK-52E细胞凋亡中的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 线粒体自噬在ox-LDL加重造影剂诱导NRK-52E细胞凋亡中的影响 |
| 2.3.2 本研究的不足与展望 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 线粒体自噬在肾小管上皮细胞损伤中的作用 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达（论文参考文献）
- [1]基于中医象思维探讨肾衰饮干预慢性肾功能衰竭大鼠的机制研究[D]. 张亮. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [2]电针三焦经腧穴联合金匮肾气丸干预庆大霉素诱发大鼠耳、肾毒性的实验研究[D]. 周柳新. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [3]肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究[D]. 潘雅婧. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]犬脂肪间充质干细胞及其外泌体修复庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤[J]. 林嘉颖,陈淑仪,陈胜锋,王丙云,陈志胜,刘璨颖,白银山,计慧琴,谢仕廷. 中国组织工程研究, 2020(25)
- [5]犬脂肪间充质干细胞对庆大霉素致犬急性肾损伤的修复及其机制[D]. 林嘉颖. 佛山科学技术学院, 2020(01)
- [6]脂肪间充质干细胞对猫急性肾损伤的修复作用及其机制[D]. 罗冬章. 佛山科学技术学院, 2020(01)
- [7]胰激肽原酶对他克莫司诱导肾损伤的保护作用及其机制[D]. 张隆业. 延边大学, 2019(01)
- [8]黄精多糖对庆大霉素诱导大鼠肾损伤的保护作用研究[D]. 孙桃桃. 安徽农业大学, 2019(05)
- [9]花鹿茸总蛋白减轻庆大霉素肾毒性的研究[D]. 孙航. 吉林农业大学, 2019(03)
- [10]Ox-LDL对造影剂诱导肾小管上皮细胞损伤的影响[D]. 周俊珂. 天津医科大学, 2019(02)